(Продолжение Изменения № 1 к ГОСТ 31674—2012)
водный раствор ацетона должен быть нетоксичным при биотестировании. Качество ацетона проверяют
каждый раз при использовании новой партии.
4.4.4.3 Проведение первого этапа биотестирования на инфузориях Paramecium caudatum (пара
меции каудатум)
Готовят прибор и задают параметры испытаний в соответствии с инструкцией.
Первый этап проводят для проб, подготовленных в виде водного экстракта (см. 4.4.4.1) и водного
раствора ацетонового экстракта (см. 4.4.4.2).
В лунки внутреннего круга планшета дозатором вносят по 300 мм3культуры Paramecium caudatum
(парамеции каудатум) (см. 4.4.3.2). включают процесс подсчета в режиме «Краткосрочное исследова
ние — Parameciums». Далее вносят по 300 мм3экстрактов проб и через 2 ч повторяют подсчет.
Примечание — Если пробыпредставляютсобойэмульсииили имеютвзвесьтонкой фракции, не выпав
шей восадок приценгрифугировании. товторойподсчетпроводят после раститровкисодержимоголунок (инфузо
рий с пробами). В зависимости от степени мутности пробраститровку осуществляют из одной лунки впять (1—5).
вдесять (1—10) илидвадцать(1—20) лунок.
После окончания первого этапа биотестирования на основании автоматического подсчета инфу
зорий Paramecium caudatum (парамеции каудатум) с помощью программы рассчитывают коэффициент
выживаемости К2. %.
К2 = — -100,(3)
п 1
где п2 — количество инфузорий после экспозиции в пробе, шт.;
л, — количество инфузорий до начала экспозиции в пробе, шт.;
100 — коэффициент перевода результата в проценты.
Полученные результаты оценивают всоответствии с таблицей 2 и принимают решение об оконча
нии или продолжении испытаний.
4.4.4.4 Проведение второго этапа биотестирования на инфузориях Tetrahymena pyriformis (тетра-
химена пириформис)
Культуру инфузории Tetrahymena pyriformis (тетрахимена пириформис) (см. 4.4.3.3) разбавляют
в 10 раз дистиллированной водой. В лунки внешнего круга планшета дозатором вносят по 10 мм3 раз
бавленной культуры, добавляют по 150 мм3 дистиллированной воды, включают процесс подсчета в
режиме «Краткосрочное исследование — Tetrahymena pyriformis». Далее вносят по 150 мм3экстрактов
проб и через 20—24 ч повторяют подсчет. При необходимости раститровку для второго подсчета осу
ществляют аналогично раститровке первого этапа.
После окончания второго этапа биотестирования оценивают увеличение количества инфузорий
Tetrahymena pyriformis влунках с экстрактом проб по сравнению с увеличением количества инфузорий в
контрольном растворе, которым является разбавленная в20 раз среда культивирования этих инфузо
рий. Все подсчеты количества инфузорий осуществляются автоматически и сохраняются.
На основании автоматического подсчета инфузорий Tetrahymena pyriformis (тетрахимена пири
формис) с помощью программы рассчитывают коэффициент относительного прироста Ку %. по фор
муле
К°2 Л2к .Юр(4)
3 "i пи
где п2 — количество инфузорий после экспозиции в пробе, шт.;
n2t — количество инфузорий после экспозиции в контрольном растворе, шт.;
л, — количество инфузорий до начала экспозиции в пробе, шт.;
л1в— количество инфузорий до начала экспозиции в контрольном растворе, шт.;
100 — коэффициент перевода результата в проценты.
Полученные результаты оценивают всоответствии с таблицей 3 и принимают решение об оконча
нии или продолжении испытаний иными методами.
8