ГОСТ 31674-2012
Масло подсолнечное рафинированное по ГОСТ 1129.
5.1.2Подготовка к проведению испытаний
5.1.2.1 Среднюю пробу корма измельчают и просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
5.1.2.2 Для приготовления ацетонового экстракта испытуемого корма в колбу с пришлифованной
пробкой вместимостью 500 см3помещают 50 г измельченного корма, заливают его 150 см3ацетона и
оставляют для экстракции на 24 ч или экстрагируют 3 ч на аппарате для встряхивания жидкостей.
Слой экстрагента над пробой должен быть не менее 1 см.
После окончания экстракции жидкость фильтруют через бумажный фильтр и помещают в чашку
для выпаривания. Оставшийся в колбе корм дополнительно промывают небольшой порцией
экстрагента (не менее 20 см3), эту промывную жидкость фильтруют через тот же фильтр в ту же
чашку.
Экстракт концентрируют в вытяжном шкафу до полного удаления запаха растворителя и
получения маслянистого остатка желтоватого или коричневого оттенка. Для ускорения процесса
чашку для выпаривания с экстрактом помещают на водяную баню температурой от 45 X до 50 °С.
Периодически оседающий на стенках чашки осадок смывают на дно чашки, покачивая ее и
обмывая стенки растворителем. Экстракт, оставшийся на стенках чашки, смывают экстрагентом на
дно. затем снова концентрируют. В чашку, при необходимости, добавляют растительного масла в
таком количестве, чтобы общий объем пробы был не менее 1 см3. Экстракт хранят в холодильнике.
При одновременном тестировании ацетонового экстракта данного образца на кроликах и мышах
следует брать навеску массой 150 г, помещать ее в коническую колбу на 1000 см3 и заливать от 300 до
400 см3ацетона.
5.1.2.3 Приготовление тест-организма проводят в следующем порядке. У кролика на участке
кожи с размерами 6 * 6 см в области бедра, лопатки или бока в день постановки испытания
тщательно выстригают волосяной покров (до полного оголения). Не допускается для испытания кожа
поврежденная, пигментированная, а также с признаками шелушения.
На одном кролике допускается ставить одновременно не более четырех проб. Повторное
использование кролика для постановки биопробы допускается лишь при получении отрицательных
результатов предыдущих испытаний и полного восстановления шерстного покрова.
Все корма для вивариумиых животных, используемых в биотестировании, должны быть
непременно проверены на общую токсичность и иметь отрицательные результаты. В противном
случае в крови животных будет идти процесс накопления антигенов, который выражается в
аллергической реакции кожи. Постановка биотеста на таком животном даст искаженные результаты
испытания.
5.1.3Проведение испытания
На выстриженный участок кожи кролика стеклянной или пластиковой лопаткой наносят, слегка
втирая, половину экстракта, вторую половину экстракта оставляют в холодильнике для повторного
нанесения на следующий день. В качестве контроля используют один оголенный участок кожи с
размерами
6 х б см. на который не наносят экстракт. С целью предупреждения снизывания экстракта,
нанесенного на кожу, на шею кролика надевают воротник, который снимают не ранее чем через 3 сут
после первого нанесения экстракта.
Наблюдение за реакцией начинают на следующий день после повторного нанесения экстракта и
продолжают в течение 3 сут.
Новую партию растительного масла, используемого для разбавления экстракта, необходимо
предварительно проверить на токсичность. Для этого выстриженный участок кожи дважды (с
интервалом в сутки) смазывают растительным маслом и учитывают кожную реакцию. Масло не
должно вызывать покраснения кожи.
5.1.4Обработка результатов
Токсичность исследуемых кормов определяют по наличию воспалительного процесса на
воспалительная реакция кожи. Допускается наличие
сут после повторного нанесения экстракта и не
участке кожи с нанесенным экстрактом.
Корм нетоксичный, если отсутствует
гиперемии, сохраняющейся не более 2
сопровождающейся шелушением кожи.
Корм токсичный, если наблюдаются гиперемия, сохраняющаяся 3 сут и более после повторного
нанесения экстракта на кожу, шелушение, болезненность, уплотнение или отечность кожи, возможны
точечные капиллярные кровоизлияния. В случав крайней степени токсичности корма по всей
поверхности участка кожи появляются язвы, затем образуется сплошной струп.
5.1.5Оформление результатов испытания
Результаты испытаний кормов записывают в журнал и оформляют акт экспертизы или протокол
испытаний, где указывают наличие или отсутствие токсичности корма и возможность его применения.
10