ГОСТ РИСО 17853—2012
4 Методы отбора проб и анализа полимерных и металлических частиц
износа в образцах тканей
4.1 Хранение и подготовка образцов
Ткани хранят в морозильной камере при температуре минус 70 вС (или ниже) либо при комнатной
температуре в таком фиксаторе, как формалин (см. 3.2.4), разбавленном дистиллированной водой (см.
3.2.3). с объемной долей формалина 10 %. Размораживают ткани, если нужно, тщательно промывают их
дистиллированной водой, прежде чем продолжить выполнение метода извлечения. Удаляют избы ток
воды из промытых тканей, промокнув их безворсовой тканью (см. 3.3.11).
Нефиксированные ткани должны быть обработаны при универсальных условиях.
Материал хирургических инструментов, использованных для извлечения образца, должен быть
отмечен для учета возможного загрязнения.
П р и м е ч а н и е — В зависимости от места забора образца может наблюдаться вариабельность проб.
4.2 Методика выделения полимерных частиц
4.2.1 Гидролиз тканей
Имеется большое число опубликованных методов для выделения полиэтиленовых частиц из пе-
рипротезных тканей. Описанный здесь метод основан на работах (2). (3], [4].
Разрезают ткани на мелкие кусочки с помощью скальпеля и лезвия для ускорения гидролиза.
Экстрагируютлипиды из измельченной ткани, поместивобразец всмесь хлороформа иметанола в объ
емных долях 2:1 на 24 ч или до оседания ткани на дно контейнера. Извлекают и промывают ткань рас
твором НФБ (см. 3.2.8).
Добавляют к тканям 5 М NaOH (см. 3.2.12) (из расчета 10 мл 5 М NaOH на 1 г ткани) и оставляют
для гидролиза минимум на 24 ч на водяной бане с перемешиванием (см. 3.3.22) при температуре 65 аС.
0 завершении гидролиза можно судить по исчезновению видимыхтвердых фрагментов ткани в суспен
зии.
4.2.2 Очистка выделенных полимерных частиц
4.2.2.1 Общая информация
После гидролиза тканей полимерные частицы могут быть очищены несколькими способами.
Используют один из методов, описанных в 4.2.2.2 или 4.2.2.3.
4.2.2.2 Очистка полимерных частиц высокоскоростным центрифугированием
Данный метод позволяетвыделитьчастицы всех размеров вдиапазонедлинот нанометровдо не
скольких миллиметров и определить общий объем выделенных частиц износа. Охлаждают гидролизо
ванные ткани до температуры 4 *С. Добавляют равный объем ледяного абсолютного этанола (см.
3.2.1). На данном этапе возможна преципитация солей. Если это произошло, добавляют дистиллиро
ванную воду до полного растворения солей. Инкубируют раствор при температуре 4 °С с перемешива
нием. оставляют на ночь. Затем центрифугируют раствор при 20000 g в течение 2 ч при температуре 4
°С. Сливают надосадочную жидкость (супернатант) в чистую пробирку (см. 3.3.4) и перед фильтраци ей
разбавляют 400 мл дистиллированной воды.
4.2.2.3 Очистка полимерных частиц ультрацентрифугированием
Помещают 2 мл каждого из растворов сахарозы (см. 3.2.13) (р= 1.35,1,17,1,08,1.04 и 1.02 r/см1) в
пробирки для центрифугирования (см. 3.3.4) так, чтобы пробирки были заполнены приблизительно на
3/4 объема. Затем вливают отмеренные аликвоты суспензии гидролизованных тканей на поверхность
раствора сахарозы в каждую пробирку. Проводят ультрацентрифугирование при 100000 д в течение 3 ч
при температуре 5 °С. Аккуратно отбирают верхний слой в стерильную пробирку и разбавляют дистил
лированной водой при температуре 65 °С для облегчения разведения остаточной сахарозы. Обрабаты
вают ультразвуком в течение 10 мин для разрушения агломератов частиц, а затем нагревают в течение 1
ч при температуре 80 ®С для растворения сахарозы.
Добавляют отмеренные объемы суспензии к двухслойной смеси изопропанола и воды (см. 3.2.6),
помещенной в пробирки для ультрацентрифугирования, плотностью 0,90 и 0.96 г/смэсоответственно.
Проводят ультрацентрифугирование при 100000 д в течение 1ч при температуре 20 °С. После извлече ния
пробирок из ротора ультрацентрифуги слой белых частиц должен быть виден на границе раздела двух
слоев. Используя стеклянную пипетку с тонким наконечником (см. 3.3.12), через верхний слой изо
пропанола удаляют слой, содержащий частицы полиэтилена, и помещают его в стерильную пробирку.
Обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин для разрушения всех агломератов.
з