Приложение С
(справочное)
ГОСТ Р ИСО 21148—2011
Приготовление и калибровка инокулятов
С.1 Культура эталонных штаммов
Чтобы улучшить повторяемость и воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать третью (по
крайней мере, вторую) субкультуру, выращенную на агаровой среде, полученной от культур, хранимых и приготов
ленных согласно (4]. При использовании £. со//. Р. aeruginosa. S. aureusсубкультуры активируют в течение интерва
лов времени от 18 до 24 ч. При использовании С. albicans пригодна первая субкультура или вторая субкультура,
выращенная в течение от 36 до 48 ч.
С.2 Приготовление клеточных суспензий
Берут 10 см3разбавителя и вводят а 100 см3стерильную колбу, содержащую 5 гстеклянных микрошариков.
Переносят полные петли клеток, выращенных на агаровой среде, в разбавитель. Клетки должны быть суспендиро
ваны в разбавителе путем погружения петли в разбавитель итрения еео стенку колбы с целью смешивания клеток.
Встряхивают колбу 2—3 мин (используя, если возможно, механическую мешалку). Отбирают пипеткой верхнюю
часть суспензии (избегая любого контакта со стеклянными микрошариками) и переносят полученную суспензию в
стерильную емкость.
С.З Калибровка суспензий
Регулируют число клеток в суспензии до значений 1 * 10е КОЕ/см3— 3x10® КОЕ/см3 (с С. albicans от
1 х 107 КОЕ/см3доЗ х 107 КОЕ/см3). используя разбавитель, и а соответствии сданными калибровки, полученными в
лаборатории. Например, используютспектрофотометр [длиной волны (620
1
20) нм) иодноразовую кюветутолщи ной
10 мм. Измеряют спектральную поглощательную способность аликвоты и. если необходимо, разбавляют рас
твор, чтобы довести эту способность суспензии до определенного значения. Соответствующие значения
оптической плотности суспензии были получены между 0,150 и 0.460, в зависимости от штаммов.
Библиография
[1)CTFA. Microbiology Guidelines, pub. Cosmetic. Toiletry and Fragrance Assn.. ISBN 1-88261-32-8, 2001
[2) EP, Microbiological examination of поп-sterile products (2.6.12 to 2.6.13). 4th edn.. pub. European
Pharmacopoeia. 2002
[3)FDA. Bacteriological Analytical Manual. 8th edn.. pub. U.S. Food and Drug Administration, 1995
[4) EN 12353:1999. Chemical disinfectants and antiseptics — Preservation of microbial strains used for the
determinaUon of bactericidal and fungicidal activity
[5) ISO 6887-1:1999. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the
initial suspension and decimal dilutions)*
[6) ISO 7218:1996, Microbiology of food and animal feeding stuffs— General rules for the microbiological
examinations)*
[7)ISO/1EC 17025:2005. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories)*
[8) ISO/TS 11133-2:2003. Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and
production of culture media — Part 2: Practical guidelnes on performance testing of culture media*
[9)J.P. 14:2001. General tests — Microbial limit test. pub. Japanese Pharmacopoeia
[10)JCIA. Microbial test methods for cosmetics, pub. Japanese Cosmetic Industry Association. 1997
[11)USP 28:2005. Microbial limit test<61>. pub. U.S. Pharmacopoeia
* Официальный перевод этого стандарта находится в Федеральном информационном фонде.
15