Приложение А
(справочное)
ГОСТ Р ИСО 21148—2011
Основные методы идентификации
А.1 Приготовление чистой культуры
А.1.1 Общее требование
Приготовление чистой культуры начинают с селекции колонии на или в агаровой среде, которая была иноку-
лироаана разбавлением тест-пробы или культурой.
Затем выбранную колонию инокулируют на неселективной агаровой культуральной среде. После инкубации
выбирают хорошо изолированную колонию. Повторяют операцию, если это необходимо.
Используют методы чашечного высевания, описанные в А.1.2. Различные методы могутоказаться необходи
мыми в специальныхслучаях.
А.1.2 Чашечное высевание
А.1.2.1 Общие требования
Отбираютнебольшое количествосповерхности хорошо изолированнойколониикончиком стерильнойпетли.
Затем высевают либонепосредственно с клетками, присутствующими на петле (А.1.2.2). либо приготавлива
ют суспензию из этихклеток (А.1.2.3).
А.1.2.2 Прямой метод: Пример
Кончиком петли инокулируют (близко расположенными штрихами) часть, приблизительно в одну треть пло
щади. поверхности агаровой среды. Стерилизуют и охлаждают петлю. С края инокулированной площади получают
другой ряд штрихов, менее плотно расположенных,чем в первый раз. на одной половинеоставшейся еще не иноку
лированной площади поверхности. Повторяютоперацию наоставшейся площади поверхности, располагая штрихи
еще более широко (см. рисунок А.1).
РисунокА.1 — Пример чашечного посева: прямой метод
А.1.2.3 Методе использованием разбавления
Суспендируют клетки в селективном разбавлении объемом 1—2 см3, проводя инокулированной петлей по
стенке пробирки у поверхности жидкости, затем хорошо перемешивают.
Стерилизуют и охлаждают петлю. С помощью петли отбирают небольшое количествомикробной суспензии и
продолжают согласно А.1.2.2.
А.1.3 Инкубация
Переворачивают инокулированные чашки Петри и помещают их в термостат на заданный период времени
при заданной температуре.
А.1.4 Селекция
После инкубации выбирают хорошо изолированную колонию из чашки либо для последующего высевания,
либо для проводимых испытаний.
Если возможно, то окончательные испытания следует проводить, используя клетки, выращенные из одной
единственной колонии В случае недостаточного клеточного материала водной колонии сначала необходимо осу
ществить субкультивирование в жидкой среде или на скошенной агаровой среде, после чего субкультуру можно
использоватьдля проведения испытаний.
11