ГОСТ РИСО 20776-1— 2010
Приложение А
(обязательное)
Требования к бульону Mueller— Hinton
А.1 Общие положения
Добавки, помимо двухвалентных катионов или других дополнительных компонентов, не должны использо
ваться, если они не являются необходимыми для роста испытуемых организмов.
А.2 Испытания неприхотливых микроорганизмов в бульоне Mueller— Hinton
А.2.1 Общие положения
Стандартной средой для испытания неприхотливых микроорганизмов является бульон Mueller— Hinton.
Оригинальная формула его приготовления следующая (10):
обезвоженная вытяжка из 300 г мяса;
кислотный отвар казеина 17,5 г.
крахмал 1.5 г;
QSP дистиллированная вода 1000 мл;
pH 7.2 — 7.4.
А.2.2Добавление и содержание катионов
Бульон должен содержать достаточную концентрацию катионов, чтобы обеспечить адекватный рост и что
бы позволить пользователю определить значение МПК для контроля качества штаммов в пределах, указанных в
таблице 4.
Новые партии бульона МиеИег— Hinton могут требовать определения приемлемого содержания катионов.
Это исследование может быть выполнено с помощью индуктивно-сопряженной плазменной спектроскопии (ICP)
пламенной атомно-абсорбционной спектрометрии (FAAS) [11].
Для добавления ионов кальция и магния готовят растворы 10 мг/л хлорида кальция (3.68 г СаС12-2Н20
в 100 мл деионизированной воды) и хлорида магния (8.36 г МдС12-6Н20 в 100 мл деионизированной воды),
стерилизуют с помощью мвмбранногог фильтра и хранят при температуре от 2 "С до 8 *С. Каждые 0.1 мл раствора
катионов 10 мг/л. добавленные к 1л бульона, повышают содержание катионов на 1мг/л. Добавляют при помеши
вании при температуре от 2 *С до 8 *С.
Для большинства комбинаций антибактериальный агент-бактерия добавление кальция и магния до окон
чательной концентрации от 20 до 25 мг/л соответственно позволило получить правильные результаты контроля
качества [12]. [13].
Для daptomycin требуется окончательная концентрация ионов кальция в среде 50 мг/л [14].
Для агентов carbapenem — imipenem и meropenem — было показано, что окончательная концентрация
цинка должна быть меньше 3 мг/л [15]. Массовая концентрация цинка, необходимая для максимальной активно сти
других препаратов carbapenem, не была установлена, но возможно она должна быть на том же уровне.
А.2.3 Испытание родов Streptococcus
При испытании родов Streptococcus к содержащей катионы среде бульона Mueller— Hinton должна быть
добавлена лизированная лошадиная кровь до окончательной концентрации от 2.5 % до 5.0 % . Кровь должна
быть получена от заслуживающего доверия поставщика. Должна быть известна информация о гематокрите (не
менее 30 %). Для приготовления лизированной крови смешивают равные обьемы дефибринированной крови и
стерильной дистиллированной воды. Замораживают при температуре минус 20 ”С и размораживают до оконча
тельного лизирования клеток (может требоваться пять— семь циклов замораживания— оттаивания). Центрифу
гируют для просветления раствора. Полученный препарат лизированной крови является базовым раствором с
объемной концентрацией 50 %.
А.2.4 Дополнительные сообщения о средах
А.2.4.1 Общие положения
В настоящее время невозможно указать все возможности, которые появятся для контроля качества и
референтного испытания антимикробной чувствительности аэробных и факультативно-аэробных бактериальных
родов. Некоторые данные об эффектах сред содержатся в неопубликованных материалах. Новые агенты потребу ют
«стандартных» препаратов среды. Пользователи будут требовать подтверждения, что параметры стандартов
контроля качества будут соответствовать и что новые издания будут доступны на международном уровне, так что
настоящий стандарт может обновляться регулярно.
А.2.4.2 Sulphonamides и trimethoprim
Среда должна иметь массовую концентрацию тимидина менее чем 0.03 мг/л. Такая среда предотвращает
использование для испытания других антимикробных средств.
A.2.4.3Tigecycline
Tigecycline должен быть добавлен в бульон Mueller— Hinton в течение 12 ч приготовления бульона. Приго
товленные планшеты для микроразведения могут быть заморожены.
А.2.4.4 Dalbavancin
Для испытания Dalbavancin отрегулированный катионами бульон Mueller— Hinton должен быть дополнен
полисорбатом — 80 объемной долей 0.002 %.
16