ГОСТ РИСО 20776-1— 2010
Т а б л и ц а 2 — Подготовка рабочих растворов антибактериальных агентов для использования при испытаниях
чувствительности с применением разведений в бульоне [8]
Концентрация антибактериального
агента о базовом растворе, мг/л
Объем базового
раствора, мл
Объем
бульона*, мл
Полученная концентрация
антимикробного агента мг/л
5120
1
9
512
512
1
1
256
512
1
3
128
512
1
7
64
64
1
1
32
64
1
3
16
64
1
7
8
8
1
1
4
8
1
3
2
8
1
7
1
1
1
1
0.5
1
1
3
0.25
1
1
7
0.125
аБульон, использованный для разведения, затем используют для теста чувствительности. Любую
добавку вводят перед введением антибактериального агента, чтобы сохранить требуемую концентрацию.
3.3.4 Подготовка планшетов для микроразведения
Рабочие растворы распределяют в планшеты для микроразведения по 50 мкл на лункус удвоенной
желательной окончательной концентрацией антибактериальногоагента, или по 100 мкл в лунку сжелатель
ной окончательной концентрацией.
По крайней мере одна лунка, содержащая 50 мкл или 100 мкл антибактериальной среды без агента,
должна быть использована как контроль роста для каждого проверяемого штамма. Аналогично, лунка,
содержащая 100 мкл среды без антибактериального агента, должна быть использована как неииокулиро-
ванная лунка отрицательного контроля для каждого проверяемого штамма.
3.3.5 Хранонио планшотов для микроразведения
Заполненные планшеты могут использоваться немедленно или могут быть сохранены в течение трех
месяцев. Для хранения заполненные планшеты должны быть запечатаны в полиэтиленовые пакеты и не
медленно помещены в морозильник при температуре ниже минус60 °С. если нет информации относитель но
устойчивости антибактериального агента при более высоких температурах.
Хотя антибактериальныеагенты в замороженных планшетах обычноостаются устойчивыми в течение
нескольких месяцев, определенные агенты (например, clavulanic add и imipenem) более лабильны, чем
другие, и должны храниться при температуре ниже минус 60 °С. Подносы не следует хранить в морозиль
нике с функцией саморазмораживания и допускать их растаивание, антибактериальные растворы нельзя
повторно замораживать, так как повторные циклы таяния — замораживания ускоряютдеградацию некото
рых антибактериальных агентов, особенно [i-лактамов.
3.4 Подготовка инокулюма (прививочного материала)
3.4.1 Общие положения
Стандартизация инокулюма существенна для точного и воспроизводимого испытания чувствительно
сти методом разведения в бульоне. Поэтому проверки чистоты и подсчетжизнеспособных колоний должны
быть выполнены на каждом изоляте. проверенном с применением данной референтной методики.
Инокулюм может быть приготовлен путем разведения бульонной культуры или суспензии колоний,
взятых из ночной культуры на иеселективной агаровой среде, в бульоне или солевом растворе. Для любо го
метода берут четыре или пять колоний, выросших на чистой неселективной питательной агаровой среде,
чтобы избежать случайного выбора нетипичного варианта микроорганизма.
8