ГОСТ Р 53944—2010
бивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия, через одно из этих отверстий из яйца
полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную кол бу
вместимостью 200 см3. Кжелтку постепеннодобавляют (частями по20—30 см3) 200см3стерильного
изотонического раствора, содержимое тщательно встряхивают (гомогенизируют) до получения
гомогенной массы.
Для приготовления желточно-солевого агара на 1дм3стерильного расплавленного иостуженного
до (45 i 1) вС солевого агара добавляют 200 см3желточной эмульсии, после полного размешивания
желточно-солевой агар разливают встерильные чашки Петри по20—25см3ихранятв холодильникедо
5—7сут.
6.4 Приготовленные растворы реактивов, если в техническом документе не установлено иначе,
хранят во флаконах из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике при температуре 4 °С—8 °С не
более 3 мес или притемпературе 18 °С—23 °С — не более 1мес.
6.5 Приготовление мазков и окраска по методу Грама по ГОСТ Р ИСО 7218. Допускается прово
дить окраскумазковмодифицированным методом по Граму(безфенола)по{7]. а также сиспользовани
емтест-полосокдляопределения аминопелтидазы (экспресс-методопределенияграмотрицательныхи
грамположительных микроорганизмов) по [4].
7 Метод выявления и определения количества мезофильных аэробных
и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ)
7.1 Сущность метода
Метод основан на высеве определенного количества продукта в плотные культуральные среды,
аэробном культивировании посевов при температуре (30 х 1) “С в течение (72 ± 3) ч, подсчете всех
выросших видимыхколоний иопределении количества мезофильныхаэробных ифакультативно-анаэ
робных микроорганизмов в 1см3(г) продукта.
7.2 Проведение анализа
Из навески подготовленной пробы продукта (см. 6.1) готовят исходное и ряд 10-кратных разведе
ний(см. 6.2) дотакойстепени, чтобы можнобылоопределитьпредполагаемоеколичество мезофильных
аэробных ифакультативно-анаэробных микроорганизмов в 1см3(г) яичного продукта.
Посевы проводят глубинным агаровым методом. Перед посевом чашки маркируют. На дне чашки
Петри маркером ставят номер исследуемого образца продукта, разведение идату. Высевают одновре
менно в две чашки Петри (параллельные определения) по 1 см3соответствующих последовательных
разведений. Пипеткус посевным материаломдержатподуглом 45е.не касаяськонцом пипеткидна чаш
ки.
В каждуючашкуПетри с посевным материалом непозднеечемчерез 15мин добавляют(18 ± 2)см3
однойизагаризованных расплавленных иохлажденныхдо температуры (45 ± 1) °Скультуральных сред
(питательного, мясо-пептонного агара. ГРМ-arapa или др.). Чашки с посевами, залитыми питательной
средой, осторожнопокачиваютили вращают для равномерногораспределенияпосевного материалаво
всей питательнойсреде.
Чашки Петри с посевами расставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания
культуральной среды.
Для предотвращения роста микроорганизмов, образующих налеты на поверхности среды (ползу
чий рост), в чашки Петри с посевным материалом наливают (13 * 2) см3 выбранной культуральной сре
ды. перемешивают и после застывания на нее наливают без перемешивания второй слой — (5 ± 2)
см3 этойже разогретой и охлажденной до температуры (45 ± 1)еС культуральной среды.
Послезастываниясредычашкис посевами, перевернутыедном вверх, культивируютвтермостате
при температуре (30
а
1
)
°С в течение (72
♦
3) ч. Допускается предварительный учет количества вырос
ших колонийчерез (48 * 1) ч с последующим окончательным учетом еще через (24 i 1)ч. Чашки Петри с
посевами распределяют в термостате по ГОСТ Р ИСО 7218.
7.3 Обработка результатов
7.3.1 Результаты анализа оцениваютпо каждой пробе отдельно.
Подсчетмикроорганизмов проводятпо ГОСТ Р ИСО 7218. Подсчет проводят в посевахтого разве
дения. количество колоний в котором не более 300.
Для получения достоверных результатов при подсчете количества колоний необходимо, чтобы
хотя бы в однойчашке содержалось не менее 15 колоний.
ю