ГОСТ Р 52816— 2007
9.3.2 Инокуляция и инкубация
9.3.2.1 Для посева жидкого продукта и/или каждого разведения используютдве параллельные чашки
Петри. Переносят стерильной пипеткой 1см3жидкого продукта или соответствующего разведения в центр
каждой чашки. При посеве жидкого продукта и/или каждого разведения в чашку Петри используютотдель
ную стерильную пипетку.
9.3.2.2 В каждую чашку Петри (9.3.2.1) наливают около 15 см3одной из сред (6.5— 6.7) температурой
44 °С — 47 °С. Время, прошедшее между посевом продукта и/или его разведения в чашку Петри и залив
кой среды, не должно превышать 15 мин.
Аккуратно перемешивают инокулят со средой и оставляют смесь для застывания, для этого чашки
Петри помещают на холодную горизонтальную поверхность.
В качествеарбитражной среды используют VRBL — агар.
Параллельно для контроля стерильности агаризованной среды в стерильную чашку Петри наливают
приблизительно 15 см3среды и инкубируют вместе с посевами.
9.3.2.3 После застывания среды в чашках Петри на ее поверхность наливают около 4 см3использо
ванной агаризованной среды (6.5 — 6.7) температурой 44 °С— 47 вС для создания второго слоя.Добавлен
ная среда должна затвердеть, как описано в 9.3.2.2.
9.3.2.4 При определенииколиформныхбактерийпосевом наагаризованныв селективно-диагнос
тические среды (6.5
— б.
7) по 0.1 или0.2 см3навескипродукта или ого разведениянаносят на
поверх
ность
одной из этих сред, разлитых в две параллвлышю чашки Петри. Подготовку чашек Петри со
средой к посевуи посевпроводят поГОСТ 26670.
При применении метода мембранных фильтров по ГОСТ 26670 фильтры пореносят на поверх
ность агаризованной селективно-диагностической среды, избегая образования пузырьковвоздухамеж
дусредой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшимина ней бактериямидолжна быть обращена
вверх.
При посеве методом мембранных фильтров на них подсчитывают количество колоний и в том
случае, если ихменее 15.
9.3.2.5 Переворачивают крышкой вниз приготовленные чашки no 9.3.2.3 и
9.3.2.4
и инкубируют в
термостате при температуре (37 ±
1)
°С в течение (24 ± 2) ч.
9.3.3 Подсчет количества колоний
После инкубации по 9.3.2.5 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний. Посевы про
сматривают и отмечают рост типичных и атипичных колоний.
На VRBL-arape типичные колонии колиформных бактерий пурпурно-красные диаметром не менее
0.5 мм, иногда окружены красноватой зоной преципитата (осадка) желчи.
На агарес бриллиантовымзеленым и феноловым красным типичныеколонии колиформныхбак-
пюрий
зеленоватые,
окруженные яркойжелто-зеленойзоной.
НасредеЭндотипичныеколонииколиформных бактерийотрозовогодокрасногоцвета, часто с
металлическимблеском.
Атипичные колонии отличаются от типичных по цвету и размеру. К атипичным относят также все ти
пичные колонии, выросшие в результате ферментации сахаров, за исключениемлактозы, содержащихся в
пищевых продуктах. Такие колонии не будут принадлежать к колиформным бактериям.
Подсчитывают
на
агаризованных средах отдельно количество типичных и атипичных колоний.
9.3.4 Подтверждение принадлежности бактерий из колоний к колиформным бактериям
Отбирают не менее чем по пятьатипичных и типичных колоний. Каждую отобранную колонию пересе
вают в пробирки с одной из жидких питательных сред, приготовленной по 6.1 — 6.4.
В качестве арбитражной среды используют лактозный бульон с бриллиантовым зеленым и
желчью.
Рост с газообразованием при температуре (37 ± 1) °С в течение 24 ч указывает на принадлежность
бактерий из атипичных и типичных колоний к колиформным.
9.3.5 Подсчет и выражение результатов
Если при подтверждении типичных или атипичных колоний в 80 % случаев, то есть не менее чем
в четырех из пяти колоний, подтвержден рост колиформных бактерий, то считают, что все колонии, вырос
шие на чашке Петри (см. 9.3.3), принадлежат к колиформным бактериям. В остальных случаях количество
10
192