ГОСТ 13496.21-87 С. 6
Растворы доводят дистиллированной водой в мерной колбе до 1дм3.
3.3.2.2. Приготовление кадмиево-нингидринового реактива
Раствор А: (готовят непосредственно перед употреблением). 0.5 г н нигидрина растворяют в
50 см3 ацетона.
Раствор В: 1.0 г уксуснокислого кадмия растворяют в смеси 50 см3ледяной уксусной кислоты
и 100 см3дистиллированной воды.
Для проявления двух пластинок берут смесь из 50 см3 раствора А и 10 см3раствора В.
3.3.2.3. Приготовление стан<)артиых раство/юв аминокислот
Основные стандартные растворы лизина готовят по п. 2.3.2.3 и триптофана —по п. 2.3.2.4.
Рабочие стандартные растворы с близкими к предполагаемым концентрациям аминокислот в
исследуемых пробах готовят из основных растворов разведением в буфере с pH 2,2 — для лизина и
водном растворе нзопропанола —для триптофана.
3.4. Проведение испытания
3.4.1. П о д г о т о в к а г и д р о л и з а т о в
3.4.1.1. Проведение киаотного гидрол та в растворе соляной кислоты с концентрацией
6 моль/дм3для оп/>еделения лизина
а) Гидролиз в термостате
Навеску воздушно-сухого корма массой (100±0,1 мг) аккуратно переносят на дно ампулы с пе
ретяжкой, добаатяют 2—3 капли этилового спирта и дозатором приливают 10 см3 раствора 6
моль/дм3 соляной кислоты. Ампулу запаивают в пламени газовой горелки в месте перетяжки,
устанавливают в штатив и помешают в предварительно нагретый до температуры 110 ’С сушильный
шкаф на 24 ч. После завершения гидролиза ампулы охлаждают до комнатной температуры, содер
жимое осторожно взбалтывают и переносят на беззольный фильтр.
При наличии стеклянных микропипеток гидролизат используютдля нанесения на хроматогра
фическую пластинку.
При отсутствии стеклянных микропипеток гидролизат количественно переносят на беззоль
ный фильтр. Фильтрат выпаривают досуха и растворяют в 5 см1буферного раствора с pH 2,2.
б) Гидролиз в автоклаве
Навеску воздушно-сухого корма массой (10040,1) мг аккуратно переносят на дно пробирки
вместимостью 20 см3, добавляют 2—3 капли этилового спирта и дозатором приливают 10 см3 рас
твора 6 моль/дм3соляной кислоты. Пробирки закрывают стеклянными колпачками или воронками
для предотвращения разбрызгивания кислоты при нагревании и помешают в автоклав. Гидролиз
проводят при давлении 0.25 МПа и температуре 137 ’С втечение 3 ч. После завершения гидролиза
пробирки охлаждают до комнатной температуры, осторожно взбалтывают и переносят содержимое
на беззольный фильтр.
При наличии стеклянных микропипеток гидролизат используютдля нанесения на хроматогра
фическую пластинку1.
При отсутствии стеклянных микропипеток гидролизат количественно переносят на беззоль
ный фильтр. Фильтрат выпаривают досуха и растворяют в 5 см3 буферного раствора с pH 2,2.
3.4.1.2. Проведение гидролиза с гидроокисью бария для определения содержания триптофа
на —по п. 2.4.1.2 и операцию гидролиза заканчивают на стадии добавления равного объема раство
ра углекислого натрия.
3.4.2. П о д г о т о в к а к х р о м а т о г р а ф и р о в а н и ю
3.4.2.1. Уравновешивание пластинок «Фиксион 50х 8»
Хроматографическую пластинку обратной стороной накладывают на стеклянную пластинку,
накрывают двумя слоями фильтровальной бумаги размером 20х 30 см. Перегнув выступающий ко
нец фильтровальной бумаги через верхний край стеклянной пластинки, закрепляют его резиновым
кольцом.
Стопку пластинок (3—5 шт.) помешают в камеру для хроматографирования, куда предвари
тельно наливают буферный раствор с pH 3,28 слоем 1—1,5 см. Нижний край пластинок должен быть
погружен в раствор на I см. Пластинки выдерживают в закрытой камере в течение суток при ком
натной температуре, затем снимают фильтровальную бумагу и высушивают на воздухе. Пластинки
хранят в темпом месте не более 1 мес.
3.4.2.2. Подготовка пластинок к хроматографированию
С краев уравновешенных пластинок считают ионообменный слой смолы шириной 3 мм для
более равномерного продвижения буферного раствора. На расстоянии 2 см от нижнего края плас
тинки простым карандашом проводят две линии с расстоянием между ними не более 1мм (линия
173