С. 3 ГОСТ 13496.21-87
2.4.Провеление испытания
2.4.1. П о д г о т о в к а г и д р о л и з а т о в
2.4.1.1. Проведение кислотного гидролиза в растворе соляной кислоты концентрации 6моль/дм3
для определения лизина
а) Гидролиз в термостате
Навеску воздушно-сухого корма массой (100±0,1) мг аккуратно переносят на дно ампулы с пе
ретяжкой, добавляют 2—3 капли этилового спирта и дозатором приливают 10 см3 раствора
6 моль/дм3 соляной кислоты. Ампулу запаивают в пламени газовой горелки в месте перетяжки,
устанавливают в штатив и помешают в предварительно нагретый до температуры 110 *С сушильный
шкаф на 24 ч. После завершения гидролиза ампулы охлаждают до комнатной температуры, взбал
тывают и содержимое переносят на беззольный фильтр.
2 см3фильтрата выпаривают досуха и осадок растворяют в 10 см3буферного раствора с pH 2.2
или добавляют 5 см3нейтрализующего раствора. Содержимое перемешивают. Гидролизат готов для
нанесения на хроматографическую колонку.
б) Гидролиз в автоклаве
Навеску воздушно-сухого корма массой <100±0,1) мг аккуратно переносят на дно пробирки
вместимостью 20 см3, добавляют 2—3 капли этилового спирта и дозатором приливают 10 см3 рас
твора 6 моль/дм3соляной кислоты. Пробирки закрывают стеклянными колпачками или воронками
для предотвращения разбрызгивания кислоты во время гидролиза и помещают в автоклав. Гидролиз
проводят при давлении 0.25 МПа и температуре 137 *С в течение 3 ч. После завершения гидролиза
пробирки охлаждают до комнатной температуры, осторожно взбдзтывают и содержимое переносят
на беззольный фильтр. 2 см’ фильтрата выпаривают досуха и приливают 10 см ’ буферного раствора с
pH 2,2 или добавляют 5 см3 нейтрализующего раствора. Содержимое перемешивают. Гидролизат
готов для нанесения на хроматографическую колонку.
2.4.1.2. Проведение гидролиза с гидроокисью бария для определения содержания триптофана
Навеску воздушно-сухого корма массой (200±0,1) мг аккуратно переносят на дно ампулы с пе
ретяжкой, добавляют 2—3 капли этилового спирта. 1.6 г свежерастертой в фарфоровой ступке гид
роокиси бария и содержимое тщательно перемешивают. Затем приливают 3.0 см3дистиллирован
ной воды на каждую пробу. Ампулы запаивают в месте перетяжки в пламени газовой горелки и
помешают в предварительно нагретый до температуры 110 *С сушильный шкаф на 18ч. По оконча нии
гидролиза ампулы тщательно встряхивают, охлаждают до комнатной температуры и помешают в
холодильник на 1,5—2 ч для осаждения ионов бария.
Метолом обратногофильтрования отбирают из пробирки 1см3 надосадочной жидкости и при
ливают равный объем раствора углекислого натрия с массовой долей 10 % для осаждения оставше
гося бария. Пробирки с гидролизатами закрывают пробками и хранят в холодильнике.
Перед нанесением на хроматографическую колонку pH гидролизатов доводятдо 2,2. Для этого
берут аликвотную часть гидролизата, подкисляют ее концентрированной соляной кислотой до pH
2,2 и приливают равный аликвотной части гидролизата объем буферного раствора с pH 2,2. При
расчете учитывают данный фактор разведения.
2.4.2. П р о в е д е н и е а н а л и з а
Гидролизаты наносят на колонку автоанализатора аминокислот. Для сравнения испытуемых
гидролизатов используют рабочий стандартный раствор аминокислоты. Анализ проводят по ко
роткой программе с использованием буферного раствора для идентификации основных амино
кислот в соответствии с правилами проведения анализа на аминоана-
лизаторах.
В результате получают хроматограммы с пиками кривых, площа
ди которых пропорциональны концентрациям аминокислот.
Для расчета площади пика на хроматограмме проводят базовую
линию, касательную к двум основаниям, и высоту И, проходящую че
рез вершину кривой параллельно оси ординат. На уровне, равном по
ловине высоты, проводят линию, параллельную базовой. Отрезок, от
секаемый на этой линии кривой, называется полушириной пика Ь(см.
чертеж). Площадь пика Sr в квадратных миллиметрах вычисляют по
формуле
S,= И■Ь.
170