С. 9 ГОСТ 13496.21-87
воронку Бюхнера диаметром 8—10 см по ГОСТ 9147;
бумагу фильтровальную;
казеин но Гаммерстену;
триптофан;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962;
бария гидроокись по ГОСТ 4107;
л-диметиламинобензальдегид (ДМАБ), раствор с массовой долей 0.5 %\
кислоту соляную концентрированную по ГОСТ 3118. х. ч.;
нитрит натрия раствор с массовой долей 0,2 % по ГОСТ 4197, х. ч.;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709.
П р и м е ч а м и с. Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду или другие мерные средства
измерений, имеющие аналогичные метрологические характеристики.
0
2010
01
4.3. Подготовка к испытанию
4.3.1. Подготовка проб —по п. 2.3.1.
4.3.2. П р и г о т о в л е н и е р а с т в о р о в и р е а к т и в о в
4.3.2.1. Приготовление раствора нитрита натрий
( .. ) г нитрита натрия растворяют в дистиллированной воде и доводят объем в мерной
колбе до 100 см3 (готовят в день проведения анализа).
4.3.2.2. Приготовление раствора ДМАБ
(70,011.0) г ДМАБ растворяют в 100 см3 теплого 96 %-ного этилового спирта, охлаждают в ле
дяной бане, отсасывают выпавшие кристаллы на воронке Бюхнера и высушивают при комнатной
температуре между листьями фильтровальной бумаги. Операцию повторяют. Высушенные кристал
лы хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой в течение длительного времени.
(5.010.1) г ДМАБ растворяют в мерной колбе вместимостью 1дм3 концентрированной соля
ной кислотой. Раствор хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой в течение месяца.
4.3.2.3. Приготовление основного стандартногораствора триптофана
(100,0*0,1) мг триптофана растворяют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью
100 см3. I см3такого раствора содержит 1 мг триптофана.
4.3.2.4. Приготовление рабочих стандартных растворов сравнения
Вмерные колбы вместимостью 50 см3последовательно вносят основной стандартный раствор
триптофана в объемах, указанных в табл. 2. Объемы растворов доводят до метки дистиллированной
водой и тщательно перемешивают.
Т а б л и ц а 2
Номер колбы со стандартными растворами сравнении
Наименование показателе
1
234
567S9
1,01,5
2.0
2.53.03.54.04.5
Объем основного стандартного раст
вора трнпгофана. см3
0
Массовая концентрация триптофана в
растворе сравнения в пересчете на массо
вую долю аминокислоты ванализируемой
пробе, грамм на I кг воздушно-сухого
корма
0
1.01.52,0
2.53.03,54.04.5
4.3.2.5. Построение градуировочного графика
Из девяти основных стандартных растворов сравнения пипеткой берут по 2 см3 и переносят в
пенициллиновые флаконы, добавляют по 5см- раствора ДМАБ и перемешивают. Через 25 мин при
ливают по 0.2 см3 раствора нитрита натрия, перемешивают и центрифугируют в течение 3 мин с
частотой вращения 3000 мин-1. Через 10 мин раствор фотометр»руют в 5 мм кювете при длине вол ны
650 нм относительно первого раствора сравнения.
Строят градуировочный график, откладывая на оси абсцисс количество триптофана в граммах
на 1 кг пробы, а на оси ординат —соответствующую величину оптической плотности.
Для построения каждой точки градуировочного графика вычисляют среднеарифметическое
значение оптической плотности результатов двух отсчетов на приборе.
При стабильной работе прибора график проверяют по трем растворам сравнения в том интер
вале, в котором проводятся испытания. При нестабильной работе прибора растворы сравнения фо-
тометрируют одновременно с испытуемыми растворами, каждый раз строя градуировочный
гра фик.
176