ГОСТ 13496.21-87 С. 10
4.4.Проведение испытания
(100±0,1) мг воздушно-сухой пробы корма помещают втефлоновую пробирку, добавляют 0,8 г
свежерастертой гидроокиси бария и 1.5 см3дистиллированной воды. Пробирку герметично завин
чивают крышкой и встряхивают для равномерного смачивания и перемешивания содержимого.
Пробирки устанавливают вертикатыю в штатив и помещают в предварительно нагретый до
110 *С термостат на 18 ч. По окончании гидролиза пробирки с растворами тщательно встряхивают,
охлаждают до комнатной температуры и помещают в морозильную камеру холодильника
на 20—30 мин. Охлажденные гидролизаты быстро нейтрализуют, приливая в пробирку 0,8 см3
раствора с массовой концентрацией 6 моль/дм3 соляной кислоты, которую также
предварительно охлаждают в морозильной камере. Доводят объем растворов дистиллированной
водой до 50 см3. Пробирки за винчивают крышками, раствор перемешивают и в этих же
пробирках центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 3000 мин-1. Пипеткой
осторожно над осадком отбирают по 2,0 см3гид ролизата и переносят в пенициллиновые
флаконы. Добавляют по 5,0 см3раствора ДМАБ и переме шивают. Через 25 мин приливают по
0,2 см3раствора нитрита натрия, перемешивают и центрифу гируют в течение 3 мин с частотой
вращения 3000 мин-1. Через 10 мин раствор фотометрируют в 5 мм кювете при длине волны
650 нм. Оптическую плотность растворов измеряют относительно первого раствора сравнения.
Для разведения гидролизатов проб с высоким содержанием триптофана используют первый
раствор сравнения, приготовленный по п. 4.3.2.4.
Для определения потерь триптофана и установления коэффициента его разрушения парал
лельно проводят гидролиз абсолютно сухого казеина массой (0,05i0,001) г в трехкратной повтор
ности, где вместо 2.0 см3 гидролизата для окрашивания берут 1.0 см3 раствора.
Коэффициент разрушения триптофана (К) при гидролизе вычисляют по формуле
К
17,0
4-С,
где 17,0 —теоретическая масса триптофана в казеине по Гаммерстену, грамм на 1кг абсолютно су
хого вещества;
С2—средняя масса триптофана в пробах казеина, найденная по графику, грамм на 1кг абсо
лютно сухого вещества;
4 —коэффициент пересчета.
4.5.Обработка результатов
4.5.1. Массу триптофана (Л"5) в граммах на I кг воздушно-сухого корма вычисляют по формуле
где К —коэффициент разрушения триптофана;
Сз - масса триптофана в пробе, найденная по графику (с уметом разведения), грамм на I кг.
За окончательный результат принимают среднеарифметическое результатов двух параллель
ных определений.
Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений d и между резуль
татами, полученными в разных условиях Ъ. при доверительной вероятности Р = 0,95 не должны
превышать следующих значений соответственно 10 и 20 %. Результат вычисляют до третьего деся
тичного знака и округляют до второго десятичного знака. Предельная относительная погрешность
результата анализа при односторонней доверительной вероятности Р = 0,95 составляет 8 %.
4.5.2. Массу триптофана 0V6) в граммах на 1кг сухого вещества корма вычисляют по формуле
*6
100-W’’
где Хъ— масса триптофана в испытуемой пробе, грамм на I кг воздушно-сухого вещества корма;
W — влажность испытуемой пробы, %.
Допускается проведение анализа без параллельных определений при наличии стандартных об
разцов для контроля правильности анализов и достаточной точности контрольных анализов при
проведении внешнего и внутрилабораторного контроля. В этом случае контроль сходимости парал
лельных определений проводят в соответствии с нормативно-техническими документами по внут
ри лабораторному контролю, утвержденными в установленном порядке.
177