7
- Определение количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa
- Предварительное обогащение в неселективной среде
В каждую из трех колб с 90 см3 одной из неселективных сред по 4.1.1 вносят по 10 см3 продукта, если продукт жидкий, или вносят по 10 см3 исходного разведения продукта, приготовленного по ГОСТ 26669, в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 одной из неселективных сред по 4.1.1 вносят по 1 см3 продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 исходного разведения (указанного выше) продукта в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 одной из неселективных сред по 4.1.1 вносят по 1 см3 первого десятикратного разведения продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 первого десятикратного исходного разведения продукта в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
Выбор объема пробы для анализа или ее разведения зависит от предполагаемой обсемененнос- ти продукта или от нормативных значений.
- Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa
Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa проводят по 4.1.2 и 4.1.3.
- Схема определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa по методу НВЧ приведена в приложении А.
- Наиболее вероятное число бактерий вида Pseudomonas aeruginosa в 1 см3 или 1 г пробы продукта (НВЧ) рассчитывают исходя из числа посевов, в которых подтверждено присутствие этих бактерий. Определение наиболее вероятного числа бактерий вида Pseudomonas aeruginosa проводят в соответствии с приложением Б (таблица Б.1).
- Метод определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa посевом на агаризованные селективно-диагностические среды — подсчет колоний
Сущность метода
Метод определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa посевом на агаризованные селективно-диагностические среды основан на высеве определенного количества продукта и/или его разведений на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, инкубировании посевов, подсчете типичных колоний, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa.
Разновидностью метода посева на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды является посев методом мембранной фильтрации.
- Метод посева на агаризованные селективно-диагностические среды
- На подсушенную поверхность агаризованной селективно-диагностической среды двух чашек Петри наносят 0,1—0,2 см3 продукта, если продукт жидкий, или исходной суспензии в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
Две другие чашки Петри используют для исходной суспензии и/или десятикратных разведений продукта.
Внесенный в чашки Петри продукт или его исходные разведения распределяют по поверхности селективно-диагностической агаризованной питательной среды стерильным шпателем.
Посевы в чашках Петри инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
- После инкубирования посевов отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 типичных колоний. Подсчитывают на отобранных чашках Петри количество выросших типичных колоний.
При посеве методом мембранной фильтрации на них подсчитывают колонии даже в том случае, если их менее 15.
Выбирают по пять типичных колоний каждого типа для пересева на поверхность питательного агара для дальнейшего подтверждения принадлежности выросших культур к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa. Если число выросших колоний менее 5, то отбирают все выросшие колонии.
Число колоний на 1 см3 или на 1 г продукта рассчитывают по ГОСТ 26670, исходя из числа подтвержденных типичных колоний, выросших на чашках Петри.