13
- Проба для анализа, исходное разведение и десятикратные разведения
Готовят необходимое число разведений так, чтобы все пробирки, соответствующие конечному разведению, показывали отрицательный результат.
- Инокуляция
Используют три пробирки для каждой пробы продукта для анализа и (или) его разведения.
- Предварительное обогащение в неселективной среде
В каждую из трех колб с 90 см3 одной из сред, приготовленных по 6.1 или 6.2, вносят по 10 см3 продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 10 см3 исходного разведения продукта в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 одной из сред, указанных выше, вносят по 1 см3 продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 исходного разведения продукта в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 одной из сред, указанных выше, вносят по 1 см3 первого десятикратного разведения продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 первого десятикратного исходного разведения продукта в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
Каждое последующее разведение высевают, используя новую стерильную пипетку. Осторожно перемешивают инокулум и среду.
Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
- Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa
Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa проводят по 9.1.5 и 9.1.6.
- Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий вида Pseudomonas aeruginosa в 1 см3 или 1 г пробы продукта рассчитывают исходя из числа посевов, в которых подтверждено присутствие этих бактерий. Определение наиболее вероятного числа проводят в соответствии с приложением Б (таблица БД.1).
- Метод определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa посевом
на агаризованные селективно-диагностические среды — подсчет колоний
- Проба продукта для анализа и исходное разведение
Приготовление исходного разведения и десятикратных разведений — по ГОСТ 26669.
- Метод определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa посевом на агаризованные селективно-диагностические среды — подсчет колоний
По 0,1 или 0,2 см3 анализируемой пробы продукта или ее разведения наносят на поверхность одной из сред, приготовленных по 6.3 или 6.4, двух чашек Петри. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ 26670.
При посеве методом мембранной фильтрации фильтры переносят на поверхность агаризован- ной селективно-диагностической среды, избегая образования пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
Засеянные чашки переворачивают крышкой вниз и инкубируют в термостате при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
- Подсчет количества колоний
После инкубации по 9.3.2. отбирают чашки Петри, на которых выросло от 15 до 150 колоний. Посевы просматривают и отмечают рост типичных колоний.
При посеве методом мембранных фильтров на них подсчитывают количество колоний и в том случае, если их не более 15.
Характеристика типичных колоний — по 9.1.5.
- Подтверждение принадлежности бактерий из колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa
Отбирают не менее пяти типичных колоний. Каждую отобранную колонию пересевают на поверхность питательного агара. Посевы термостатируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.
Подтверждение принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa проводят по 9.1.5 и 9.1.6.
- Допускается также выявление бактерий вида Pseudomonas aeruginosa проводить посевом на агаризованную среду при условии, что анализируемую пробу продукта, в которой предусматривается выявление, возможно посеять по этому методу.
При выявлении бактерий вида Pseudomonas aeruginosa посевом на агаризованную среду подсчет количества колоний не проводят.
- Подсчет и выражение результатов
Если при подтверждении типичных колоний в 80 % случаев, то есть не менее чем в четырех из пяти