18
Описание метода НВЧ и разъяснение по его применению
- Из пробы продукта для анализа готовят исходное разведение и ряд десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое НВЧ бактерий вида Pseudomonas aeruginosa.
Высеваемые объемы продукта и его разведения выбирают следующим образом:
а) по 1 см3 из разведения 10-1 и последующих разведений, если необходимо определить количество бактерий вида Pseudomonas aeruginosa, превышающее 3 клетки в 1 г (см3) продукта;
б) по 10 см3 из разведения 10-1 или 1 см3 неразведенного продукта и по 1 см3 из разведения 10-1 и последующих разведений, если необходимо определить количество бактерий вида Pseudomonas aeruginosa, превышающее 3 клетки в 10 г (см3) продукта;
в) по 10 и 1 см3 неразведенного продукта и ряда его разведений, если необходимо определить количество бактерий вида Pseudomonas aeruginosa, превышающее 3 клетки в 100 г (см3) продукта.
- Разведения и неразведенный продукт высевают параллельно в три колбы (пробирки) с питательной средой. Инокулум объемом 1 см3 высевают в 10 см3 среды нормальной концентрации, инокулумы объемом 10 см3 высевают в 10 см3 среды двойной концентрации или в 90 см3 среды нормальной концентрации.
- Посевы инкубируют в условиях, указанных в настоящем стандарте.
- НВЧ бактерий вида Pseudomonas aeruginosa определяют исходя из количества положительных пробирок с посевами по таблице.
- Для определения НВЧ выбирают три последовательных разведения, в первом из которых все три повторности положительные, а в последнем и в последующем уже неоцениваемом разведении — все три повторности отрицательные (например: 3, 2, 0 или 3, 2, 1,0).
- Если после разведения, в котором все три пробирки были отрицательными, одна из пробирок большего (то есть следующего за ним) разведения окажется положительной (например: 3, 2, 0, 1), то для определения НВЧ учитывают три разведения, начиная с того, в котором количество положительных пробирок было меньше трех (то есть 2, 0,1).
- Если после наибольшего разведения с тремя положительными пробирками было посеяно лишь одно разведение, в котором оказались положительными одна или две пробирки, то НВЧ бактерий вида Pseudomonas aeruginosa записывают как «более чем», так как в последующих разведениях могли бы быть положительные пробирки. Например, при посеве число положительных пробирок соответствовало 3, 3, 1 или 3, 3, 2, то согласно таблице НВЧ будет более чем 460 или более чем 1100.
- Если ни в одном из разведений не было трех положительных пробирок, то для определения НВЧ учитывают три последовательных разведения (например: 2, 2, 1, 0 или 2, 1, 0, 0).
- Если все пробирки посеянных разведений будут отрицательными (то есть 0, 0, 0), то НВЧ бактерий вида Pseudomonas aeruginosa ниже числа, выявляемого посеянными разведениями (например, «ниже чем 3 в 10 г»), и наоборот, если все пробирки посеянных разведений будут положительными (то есть 3, 3,3), то НВЧ будет выше его максимального значения, определяемого посеянными разведениями (например, «выше чем 1100 в 1 г»).
При необходимости определения конечного числа бактерий исследование повторяют.
- Если три десятикратных разведения были более низкими или более высокими по сравнению с приведенными в таблице, то НВЧ бактерий вида Pseudomonas aeruginosa в продукте будет на столько разрядов ниже или выше, на сколько разрядов посеянные разведения отличаются от табличных.
Например, для комбинации чисел 3, 2, 1 НВЧ составляет 150 микроорганизмов в 1 г продукта в случае, если посеяны по 1 см3 разведения 10-1, 10-2, 10-3. Если для посева использованы разведения 10-2, 10-3, 10-4, то найденное НВЧ равно 150 ■ 10 = 1500 микроорганизмов в 1 г (см3). Если для посева использовались 10 и 1 см3 нераз- веденного продукта и 1 см3 разведения 10-1, то НВЧ равно 150:100 = 1,5 в 1 г (см3) или 15 микроорганизмов в 10 см3 продукта.