10
- Определение чистоты и типичности роста
- Аппаратура и материалы
Среда Эндо по [3].
Среда Сабуро по [4] или ГОСТ 29112.
Мясо-пептонный агар (МПА) по ГОСТ 29112.
Среда Китт-Тароцци (МППБ).
Термостат с температурой нагрева 37 °С—38 °С и 20 °С—24 °C.
Пипетки мерные вместимостью 1,2 и 5 см3 по ГОСТ 29230.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.
Чашки Петри по ГОСТ 25336.
Агар микробиологический по ГОСТ 17206.
Агар пищевой по ГОСТ 16280.
Бульон мясо-пептонный по ГОСТ 20730.
Масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164.
Раствор натрия хлорида изотонический 0,9 %-ный стерильный с рН от 7,2 до 7,4 по [2] или вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
- Проведение испытания
Для испытания применяют пять ампул (флаконов) с вакциной. Вакцину в каждой ампуле (флаконе) регидратируют в 4—5 см3 стерильного изотонического 0,9 %-ного раствора натрия хлорида и производят посев по 0,1 см3 взвеси вакцины на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и агар Сабуро в три пробирки с каждой средой. Засевают в три-четыре чашки с МПА по Дригальскому и средой Эндо. Посевы в пробирках выдерживают в течение 10 сут при температуре 37 °С—38 °С, посевы на чашках — 1 сут, на среде Сабуро при температуре 20 °С—22 °С — до 10 сут.
- Учет результатов
На питательных средах должен быть типичный рост вакцинного штамма — на МПА и среде Эндо через 24 ч должны вырасти бесцветные, прозрачные, гладкие, круглые колонии в S-форме, на МПБ через 16—18 ч должно быть равномерное помутнение. При этом вакцина не должна содержать посторонних микробов и грибов.
- Определение количества живых сальмонелл
- Для определения количества живых сальмонелл применяют аппаратуру, посуду и материалы, указанные в 4.5.1, за исключением вазелинового масла и термостата с температурой нагрева 20 °С—24 °С.
- Для определения количества живых клеток в 1 см3 вакцины содержимое трех ампул (флаконов) с сухой вакциной разводят стерильным 0,9 %-ным изотоническим раствором натрия хлорида по
- до первоначального объема. Путем десятикратных разведений готовят конечную концентрацию 1000 микробных клеток в 1 см3, из этого разведения засевают по 0,1 см3 (100 микробных клеток) в три чашки Петри с мясо-пептонным агаром. Для приготовления каждого разведения используют отдельную стерильную пипетку. Приготовление разведений одной пипеткой не допускается.
Чашки перед засевом подсушивают в термостате 30—40 мин. Посевы инкубируют при температуре 37 °С—38 °С в течение 24—36 ч, после чего подсчитывают количество выросших колоний и определяют концентрацию (число) живых бактерий в 1 см3 вакцины X по формуле
P P1 ■ 10
— + —
X = q ■ 10 ■ 108, (1)
2
где Р — количество колоний во всех чашках из разведения 10-8; q — число чашек с разведением 10-8;
Р1 — количество колоний во всех чашках из разведения 10-9;
q1 — число чашек с разведением 10-9;
10 — перерасчет количества живых бактерий на 1 см3;
108 — степень разведения вакцины.
Для определения концентрации живых сальмонелл в вакцине подсчитывают выросшие колонии на МПА в чашках по каждому разведению, полученные показатели суммируют и делят на число чашек, определяя среднее количество живых бактерий для каждого разведения, содержащихся в 0,1 см3. Затем средние показатели по каждому разведению суммируют и делят на число испытуемых разведений (два),