ГОСТ Р 54905—2012
Рабочие градуировочные растворы глюкозы готовят перед построением градуировочного графи-
ка, при этом берут по три параллельных разведения для приготовления каждой концентрации раствора
глюкозы.
4.4 Построение градуировочного графика
В 10 пробирок вместимостью 10 см
3
вносят по 1 см
3
рабочих градуировочных растворов глюкозы
молярной концентрации от 0,5 до 5,0 мкмоль/см
3
в соответствии с таблицей 1, добавляют по 1 см
3
дис-
тиллированной воды, 3 см
3
реактива ДНС (4.3.3) и быстро перемешивают.
Одновременно готовят контрольную пробу на реактивы, для чего в пробирку вносят 1 см
3
буфер-
ного раствора (4.3.1), добавляют 1 см
3
дистиллированной воды и 3 см
3
реактива ДНС (4.3.3).
Все пробирки помещают на кипящую водяную баню и кипятят в течение 5 мин с точностью, из-
меряемой по секундомеру. Пробирки охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптические
плотности растворов на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине волны 540 нм в
кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм против контрольной пробы на реактивы.
По полученным значениям строят градуировочный график оптической плотности (поглощения)
как функции от молярной концентрации глюкозы (мкмоль/см
3
): на оси абсцисс откладывают молярные
концентрации глюкозы в мкмоль/см
3
, на оси ординат — соответствующие этим растворам оптические
плотности при 540 нм.
Рабочая зона градуировочного графика лежит в пределах от 0,10 до 0,90 единиц оптической плот-
ности (ед. ОП).
Для построения каждой точки градуировочного графика вычисляют среднеарифметическое зна-
чение результатов оптической плотности трех параллельных измерений.
Градуировочный график строят для каждой новой партии реактива ДНС, а также при замене обо-
рудования.
4.5 Отбор и подготовка проб
4.5.1 Отбор проб — по ГОСТ 20264.0.
4.5.2 Порошкообразные или микрокапсулированные анализируемые пробы используют без пред-
варительной подготовки. Гранулированные анализируемые пробы измельчают (например, в механиче-
ской мельнице или фарфоровой ступке) и просеивают через сито с размером диаметра отверстий не
более 1 мм.
4.5.3 Для приготовления основного раствора анализируемой пробы в плоскодонную стеклянную
колбу помещают от 0,1 до 10 г* анализируемой пробы, взвешенной с точностью до 0,2 мг, и суспенди-
руют в небольшом количестве дистиллированной воды (около 50 см
3
) на магнитной мешалке в тече-
ние 15 мин (для порошка, микрогранулятов, микрокапсул) или 60 мин (для кормов, кормовых смесей).
Суспензию количественно переносят в мерную колбу вместимостью от 100 до 500 см
3
(в зависимости от
предполагаемой активности) и доводят объем дистиллированной водой до метки. Полученную су-
спензию центрифугируют при частоте вращения 7000 мин
–1
в течение 15 мин. Для анализа используют
надосадочную жидкость.
4.5.4 Рабочий раствор анализируемой пробы готовят из основного раствора (4.5.3) путем раз-
ведения его дистиллированной водой таким образом, чтобы при определении активности оптические
плотности опытных и контрольного растворов находились в пределах рабочей зоны градуировочного
графика. Рабочий раствор должен содержать от 0,05 до 0,5 ед.
β
-ГлА в 1 см
3
.
Раствор готовят в день определения.
4.6 Проведение анализа
4.6.1 В три пробирки (две опытные и одну контрольную) вносят по 1 см
3
субстрата
β
-глюкана
(4.3.4). Пробирки закрывают пробками, помещают в ультратермостат или на водяную баню с темпера-
турой (50 ± 1) °С и выдерживают в течение 5 мин.
4.6.2 В две опытные пробирки добавляют по 1 см
3
рабочего раствора анализируемой пробы
(4.5.3), также предварительно прогретой при температуре 50 °С, и тщательно перемешивают. Три про-
бирки (две опытные и одну контрольную) помещают в ультратермостат или на водяную баню с темпе-
ратурой (50 ± 1) °С на 10 мин (с точностью, определяемой по секундомеру).
5
* В зависимости от предполагаемой активности.