ГОСТ Р 54905—2012
лый вносят небольшими порциями. После полного растворения раствор доводят до метки дистиллиро-
ванной водой и перемешивают.
Срок хранения реактива А при комнатной температуре — 3 мес.
5.3.3.2 Приготовление реактива Б
В коническую колбу вместимостью 100 см
3
вносят (7,5 ± 0,01) г меди (II) сернокислой 5-водной
и растворяют в 42,5 см
3
дистиллированной воды. Добавляют одну каплю концентрированной серной
кислоты и перемешивают.
Срок хранения реактива Б при комнатной температуре — 3 мес.
5.3.3.3 Для приготовления реактива Шомоди смешивают 25 см
3
реактива А и 1 см
3
реактива Б.
Реактив Шомоди готовят в день применения.
5.3.4 Приготовление реактива Нельсона — по ГОСТ Р 53973.
5.3.5 Приготовление градуировочных растворов глюкозы
5.3.5.1 Приготовление основного градуировочного раствора глюкозы молярной (массовой) кон-
центрации 5 мкмоль/см
3
(900 мкг/ см
3
) проводят по 4.3.5.1.
5.3.5.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов глюкозы
Из основного градуировочного раствора глюкозы (4.3.5.1) готовят серию разведений в соответ-
ствии с таблицей 2.
Таблица 2 — Приготовление рабочих градуировочных растворов глюкозы различной концентрации
Объем градуировочного раствора
глюкозы молярной (массовой) концентра-
ции 5 мкмоль/ см
3
(900 мкг/см
3
), см
3
Объем буферного раствора
молярной концентрации
0,1 моль/дм
3
, см
3
Концентрация глюкозы
в рабочем растворе
массовая, мкг/см
3
молярная, мкмоль/см
3
0,14,9180,1
0,24,8360,2
0,34,7540,3
0,44,6720,4
0,54,9900,5
Рабочие градуировочные растворы готовят перед построением градуировочного графика, при этом
берут по три параллельных разведения для приготовления каждой концентрации раствора глюкозы.
5.4 Построение градуировочного графика
7
5.4.1 В пять пробирок вместимостью 10 см
3
вносят по 1 см
3
рабочих градуировочных растворов
глюкозы молярной концентрации от 0,05 до 0,5 мкмоль/см
3
в соответствии с таблицей 2, добавляют по 1
см
3
буферного раствора по 4.3.1 и 1 см
3
реактива Шомоди (5.3.3). Пробирки выдерживают 20 мин на
кипящей водяной бане, затем охлаждают в холодной воде до комнатной температуры. Добавляют 1 см
3
реактива Нельсона (5.3.4), перемешивают на вортексе 5 мин. Добавляют в пробирки по 5 см
3
дистил-
лированной воды и снова перемешивают.
5.4.2 Одновременно готовят контрольную пробу на реактивы, для чего в пробирку вместимостью
10 см
3
вносят 2 см
3
буферного раствора (4.3.1), добавляют 1 см
3
реактива Шомоди (5.3.3), 1 см
3
реакти-
ва Нельсона (5.3.4), перемешивают, добавляют 5 см
3
дистиллированной воды и снова перемешивают.
5.4.3 Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при
длине волны 660 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм против контрольной пробы на
реактивы.
5.4.4 Строят градуировочный график оптической плотности (поглощения) как функции от мо-
лярной концентрации глюкозы (мкмоль/см
3
): на оси абсцисс откладывают концентрации глюкозы в
мкмоль/см
3
, на оси ординат — соответствующие им оптические плотности при 660 нм.
Рабочая зона градуировочного графика лежит в пределах от 0,10 до 0,90 ед. ОП.
Для построения каждой точки градуировочного графика вычисляют среднеарифметическое зна-
чение результатов оптической плотности трех параллельных измерений.
Градуировочный график строят для каждой новой партии реактивов Шомоди и Нельсона, а также
при замене оборудования.