ГОСТ Р 54905—2012
ГОСТ 13867—68 Продукты химические. Обозначение чистоты
ГОСТ 20264.0—74 Препараты ферментные. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры
и размеры
ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные.
Часть 1. Общие требования
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных
стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по
техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному
указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по со-
ответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если
ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться
заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором
дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 53046, а также следующие термины с
соответствующими определениями:
3.1
β
-глюкан: Высокомолекулярное соединение, полимер глюкозы, в котором остатки глюкозы
соединены 1,4-
β
-гликозидными связями; с водой образует коллоидные растворы.
3.2 β-глюканаза: Фермент, катализирующий гидролитическое расщепление цепей полимеров
глюкозы — целлюлоз и гемицеллюлоз (
β
-глюканов) с образованием свободных остатков глюкозы и
олигосахаридов.
Примечание — К
β
-глюканазам экзо-действия относят экзо-1,4-глюкан-4-глюкогидролазу, КФ 3.2.1.74 [1],
катализирующую гидролитическое расщепление
β
-1,4 связи цепей целлюлоз и гемицеллюлоз (
β
-глюканов) со сто-
роны концов, содержащих нередуцирующие остатки глюкозы, с отщеплением свободной глюкозы.
4 Метод определения ферментативной активности
β
-глюканазы
с ДНС-реактивом
4.1 Сущность метода
4.1.1 Метод основан на количественном определении редуцирующих (восстанавливающих) саха-
ров, образующихся при действии
β
-глюканазы на
β
-1,4 связи
β
-глюкана при определении в стандартных
условиях.
4.1.2 Сущность метода заключается в восстановлении 3,5-динитросалициловой кислоты (ДНС)
до 3-амино-5-нитросалициловой кислоты, обладающей красно-оранжевой окраской, интенсивность ко-
торой определяют колориметрически при длине волны 540 нм.
4.1.3 За единицу
β
-глюканазной активности (1 ед.
β
-ГлА) принимают количество фермента, дей-
ствующее на
β
-глюкан с высвобождением 1 мкмоля восстанавливающих сахаров (в пересчете на глю-
козу), образующихся за одну минуту при стандартных условиях: температуре 50 °С; 4,7 ед. рН; продол-
жительности гидролиза 10 мин.
4.1.4 Содержание редуцирующих сахаров, образующихся в результате ферментативной реакции,
определяют колориметрическим методом с ДНС-реактивом и рассчитывают по градуировочному гра-
фику, построенному для глюкозы [2]—[3].
4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
2
4.2.1 При определении ферментативной активности
β
-глюканазы применяют следующие сред-
ства измерений и вспомогательное оборудование:
- фотоэлектроколориметр или спектрофотометр любого типа, который обеспечивает измерения
при длине световой волны 540 нм с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более
± 1 % (не более 0,01 единицы оптической плотности);
- весы по ГОСТ Р 53228, обеспечивающие точность взвешивания с пределом абсолютной допу-
скаемой погрешности однократного взвешивания ± 0,01 мг;