ГОСТ Р 54637—2011
3
Количественный анализ проводят с помощью метода внутреннего стандарта, используя площадь
или высоту пиков. В качестве внутреннего стандарта для определения витамина D используется ви-
тамин D
2
.
5 Требования безопасности
5.1 Условия безопасного проведения работ
При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования пожарной безопасности, уста-
новленные ГОСТ 12.1.004, электробезопасности — ГОСТ 12.1.019, техники безопасности при работе с
реактивами — ГОСТ 12.1.007, а также требования, изложенные в технической документации на спек-
трофотометр, хроматограф, другие приборы и оборудование.
Помещение, в котором проводят испытания, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиля-
цией. Контроль за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны проводят в соответствии с
требованиями ГОСТ 12.1.005.
При работе с газовыми баллонами необходимо руководствоваться [1].
5.2 Требования к квалификации оператора
К выполнению испытаний и обработке результатов допускаются лица с высшим или средним спе-
циальным образованием по профессиям химик, инженер-химик, техник, лаборант, имеющие опыт ра-
боты в химической лаборатории. Первое применение метода в лаборатории следует проводить под
наблюдением квалифицированного специалиста в области ВЭЖХ.
6 Условия выполнения испытания
6.1 Общие условия
3
Испытания проводят в нормальных лабораторных условиях: температура окружающей среды —
(25 ± 5) °С; относительная влажность — (65 ± 15) %; частота переменного тока — (50 ± 5) Гц; напряже-
ние в сети — (220 ± 10) В.
Хранение стандартных веществ проводят в защищенном от света месте и при температуре не
выше 4 °C.
При приготовлении и хранении растворов следует выполнять требования ГОСТ 27025, ГОСТ 4517.
Для предотвращения разрушения витамина D анализ испытуемой пробы и стандартов проводят
в присутствии антиоксиданта (L-аскорбиновой кислоты, гидрохинона, пирогаллола), предохраняя про-
бы от попадания на них прямого солнечного света.
6.2 Условия хроматографического анализа
3
2
Температура колонки: 25 °С или температура окружающей среды.
Объемная скорость подачи подвижной фазы для НФ и ОФ ВЭЖХ: 0,7 — 1,0 см
3
/мин.
Объем вводимой пробы для проведения полупрепаративной НФ ВЭЖХ: 0,20 — 0,25 см
3
.
Объем вводимой пробы для проведения аналитической ОФ ВЭЖХ: 0,1 см
3
.
Подвижная фаза для проведения полупрепаративной НФ ВЭЖХ (в объемном соотношении):
н-гексан : 2-пропанол (98:2) или н-гексан : 2-пропанол : тетрагидрофуран (98:1:1).
Подвижная фаза для проведения аналитической ОФ ВЭЖХ (в объемном соотношении): ацетони-
трил : метиловый спирт (80:20) или ацетонитрил : метиловый спирт : метилен хлористый (50:45:5).
Проверку оптимальности условий хроматографического разделения в условиях полупрепара-
тивной НФ ВЭЖХ осуществляют путем хроматографического анализа раствора анализируемой про-
бы по 8.2.5. Эффективность хроматографического разделения признается удовлетворительной, если
коэффициент разделения пика витамина D от пиков токоферолов матрицы составляет не менее 1,3. В
противном случае для достижения требуемой эффективности разделения экспериментальным путем
подбирают скорость потока подвижной фазы или проводят испытания других подвижных фаз и колонок.
Проверку оптимальности условий хроматографического разделения в условиях аналитической
ОФ ВЭЖХ осуществляют путем хроматографического анализа смешанного раствора витаминов D
и D
3
с массовой концентрацией каждого вещества не менее 0,5 мкг/см
3
. Данный раствор готовят из