ГОСТ Р 54637—2011
8
23
23
23
паративного анализа и проверяют повторяемость времени удерживания витамина D (в варианте НФ
ВЭЖХ витамины D и D элюируются одновременно). Хроматографические условия оптимизируют для
оптимального разделения пика витамина D от пиков токоферолов и других соединений матрицы.
Раствор смеси витаминов D и D по 8.1.2.6 несколько раз вводят в хроматограф для варианта
аналитической ОФ ВЭЖХ и проверяют повторяемость полного разделения пиков витаминов D и D
(степень разделения пиков должна быть не менее 1,0). Условия хроматографирования также должны
обеспечивать оптимальное отделение пиков витаминов D
2
и D
3
от пиков других соединений матрицы.
8.4 Построение градуировочной зависимости
3
грi
Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством
по эксплуатации оборудования и руководством пользователя по программному обеспечению.
Градуировочный график строят в координатах «аналитический сигнал, mAU·с (AU·с) или мм» —
«массовая концентрация витамина в градуировочном растворе, мкг/см
3
». Для каждого анализируемого
градуировочного раствора проводят два параллельных измерения и находят среднеарифметическое
значение. Различие между измеренными значениями аналитических сигналов и времени удерживания
не должно превышать 5 % средних значений. Линейные участки градуировочного графика должны со-
ответствовать всему диапазону определяемых концентраций витамина D . Коэффициент градуировоч-
ного графика k определяют как среднеарифметическое значение коэффициентов k, вычисляемых по
формуле
k
i
=
C
i
,
S
i
(3)
гдеС
i
— массовая концентрация микронутриентов в i-м градуировочном растворе, мкг/см
3
;
S
i
— площадь пика i-го градуировочного раствора, mAU·c (AU·c) или высота, мм.
3
Проводят хроматографический анализ не менее четырех рабочих стандартных растворов витами-
на D , приготовленных по 8.1.2.5.
Правильность построения градуировочной зависимости контролируется значением достоверной
аппроксимации R
2
≥ 0,997.
Градуировка проводится в следующих случаях: на этапе освоения метода, при изменении усло-
вий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям
результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.
9 Выполнение измерений
В колонку хроматографа для проведения аналитической ОФ ВЭЖХ последовательно вводят рав-
ные объемы испытуемого раствора по 8.2.7 и одного из градуировочных растворов по 8.1.2.5.
Идентификацию пиков проводят, сопоставляя время удерживания, спектры в УФ-диапазоне длин
волн или соотношения интенсивности сигнала детектора при различных длинах волн для соответству-
ющих пиков стандартов и определяемых соединений.
10 Обработка и оформление результатов
Поправочный коэффициент k расcчитывают с помощью метода внутреннего стандарта по
формуле
S
вн.ст
С
x
S
x
С
вн.ст
k =
,
(4)
где S
вн.ст
S
x
С
вн.ст
С
х
— площадь (mAU · с или AU · с) или высота (мм) пика внутреннего стандарта витамина D
2
;
— площадь (mAU · с или AU · с) или высота (мм) пика определяемого витамина D
3
;
— массовая концентрация внутреннего стандарта витамина D
2
по 8.1.2.3, мкг/см
3
;
— массовая концентрация определяемого витамина D
3
, мкг/см
3
.