ГОСТ Р 54085—2010
8
Образование от розового до светло-красного цвета после 15 мин указывает на положительную
реакцию.
Бактерии рода Shigella не образуют ацетоин (реакция Фогес-Проскауера отрицательная).
Допускается определение ацетоина проводить без применения раствора креатина. Для этого по-
сле инкубирования к 1 см
3
отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 см
3
раствора 1-на-
фтола и 0,2 см
3
раствора гидроокиси калия, содержимое пробирки перемешивают после прибавления
каждого реактива.
Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную реакцию.
8.5.3.6 Определение подвижности
Культуры пересевают уколом в полужидкий питательный агар (5.2.17) или полужидкий мясо-пеп-
тонный агар (5.2.18).
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1)
°
С в течение (24 ± 2) ч.
При росте подвижных культур отмечается диффузионный рост по всему столбику агара, при росте
неподвижных культур — вдоль места укола.
Бактерии рода Shigella неподвижны.
8.5.3.7 Определение утилизации цитрата
Культуру высевают в пробирки со средой Козера (5.2.13) или на поверхность среды Симмонса
(5.2.14). Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1)
°
С в течение 24—48 ч. Изменение оливково-зеле-
ного цвета сред на васильковый (или синий) указывает на положительную реакцию.
Бактерии рода Shigella не утилизируют цитрат.
8.5.3.7 Интерпретация биохимических тестов приведена в таблице Г.1 приложения Г.
8.5.4 Серологическое подтверждение
8.5.4.1 Общие положения
Определение присутствия антигенов у изучаемых культур (8.5.2) проводят путем постановки ре-
акции агглютинации на предметном стекле с соответствующими сыворотками после исключения само-
агглютинирующих штаммов. Сыворотки используют в соответствии с инструкцией изготовителя, если
есть отличие от описания, приведенного ниже.
Серологическое подтверждение принадлежности к бактериям рода Shigella проводят с культу-
рами, предварительно пересеянными на поверхность питательного агара, мясо-пептонного агара или
ГРМ-агара.
8.5.4.2 Исключение самоагглютинирующих штаммов
Помещают каплю физиологического раствора на тщательно очищенное предметное стекло.
Диспергируют в этой капле часть тестируемой колонии так, чтобы получилась гомогенная и густая
суспензия.
Допускается размешивание части колонии в капле воды и перемешивании этого раствора с одной
каплей физиологического раствора.
Стекло осторожно покачивают в течение 30–60 с. Отмечают результаты на темном фоне, лучше
с помощью увеличительного стекла. Если наблюдается в разной степени склеивание бактерий, то есть
образование осадка, то считают, что тестируемая культура бактерий обладает самоагглютинацией.
Штаммы бактерий, обладающие самоагглютинацией, не подвергают дальнейшему серологиче-
скому испытанию.
8.5.4.3 Определение наличия антигенов
Культуры бактерий, у которых не выявлено самоагглютинации, испытывают в реакции агглютина-
ции с агглютинирующими адсорбированными поливалентными шигеллезными сыворотками.
Подготовка сывороток к постановке реакции агглютинации и методика ее проведения указаны в
инструкциях, прилагаемых к сывороткам.
Агглютинация (наличие О-антигенов) проявляется в виде склеивания бактериальной массы и пол-
ного или частичного просветления жидкости.
При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей сы-
воротки образует гомогенную смесь.
Используют поливалентные сыворотки, одну после другой.
8.5.5 Интерпретация биохимических и серологических тестов
Интерпретация подтверждающих тестов (8.5.3 и 8.5.4) для испытанных культур бактерий (8.5.2)
представлена в таблице 1.