ГОСТ Р 54085—2010
На сальмонелла-шигелла агаре проводят учет ферментации лактозы и образование сероводорода.
На дезоксихолатном цитратном агаре, среде Плоскирева, среде Эндо, среде Левина проводят
учет ферментации лактозы.
На висмут-сульфитном агаре проводят учет ферментации глюкозы и обнаружение сульфитреду-
цирующих свойств.
Бактерии рода Shigella не обладают сульфитредуцирующими свойствами.
8.4.2 Посевы на чашках Петри по 8.4.1 переворачивают на крышку дном вверх и помещают в тер-
мостат при температуре (37 ± 1)
°
С и инкубируют в течение (24 ± 2) ч.
8.4.3 После инкубации просматривают чашки с посевами и отмечают присутствие типичных для
бактерий рода Shigella колоний и атипичных колоний, которые могут быть отнесены к бактериям рода
Shigella. Отмечают их местоположение на дне чашек.
Типичные колонии бактерий рода Shigella, вырастающие на XLD агаре, имеют красный цвет, кото-
рый принадлежит цвету индикатора.
Типичные колонии бактерий рода Shigella, вырастающие на гектоеновом энтероагаре, имеют зе-
леный или голубоватый цвет.
Типичные колонии бактерий рода Shigella, вырастающие на дезоксихолатном цитратном агаре,
на сальмонелла-шигелла агаре, на средах Эндо, Плоскирева, Левина, круглые бесцветные или слегка
розоватые.
Типичные колонии бактерий рода Shigella, вырастающие на висмут-сульфитном агаре, имеют се-
ро-зеленый цвет.
При отсутствии в посевах на селективно-диагностических средах типичных для бактерий рода Shi-
gella колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Shigella в анализируемой пробе продукта.
При наличии хотя бы на одной селективно-диагностической среде типичных колоний проводят
подтверждение принадлежности их к бактериям рода Shigella.
8.5 Подтверждение принадлежности выделенных бактерий к роду Shigella
6
8.5.1 Общие положения
Для определения биохимических характеристик выделенных бактерий допускается использова-
ние идентификационных наборов. Эти наборы используют в соответствии с инструкцией.
Для биохимической идентификации допускается использование тест-систем промышленного про-
изводства, разрешенных к применению в установленном порядке.
8.5.2 Отбор колоний для подтверждения
Для подтверждения берут с посева в чашку Петри по 8.4.1 (две чашки нормального размера счи-
тают за одну) каждой селективной среды (8.4) сначала одну типичную колонию и затем четыре колонии,
если первая окажется отрицательной.
Для идентификации в случае эпидемиологической ситуации одновременно отбирают пять коло-
ний. Если на одной чашке меньше пяти типичных колоний, то отбирают все типичные колонии.
Переносят отобранные колонии на скошенную поверхность питательного или ГРМ-агара в чашках
или пробирках (5.2.4) или мясо-пептонного агара (5.2.5), для идентификации отбирают полностью изо-
лированные колонии. Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1)
°
С в течение (24 ± 2) ч.
Для биохимической и серологической идентификации используют чистые культуры бактерий.
Из отобранных для биохимической идентификации колоний приготовляют мазки и окрашивают по
Граму по ГОСТ 30425.
Бактерии рода Shigella являются грамотрицательными прямыми палочками.
Допускается окраску по Граму заменять тестом Грегорсена. Для этого на предметном стекле в
капле 3 %-ного водного раствора калия гидроокиси эмульгируют культуру микроорганизмов, взятую из
колонии с агаризованной среды. Если через несколько секунд взвесь ослизнет и за петлей потянутся
слизистые нити, то это указывает на принадлежность анализируемой культуры к грамотрицательному
виду бактерий. У грамположительных бактерий слизистых нитей не образуется.
8.5.3 Биохимическое подтверждение
У отобранных и предварительно пересеянных культур изучают характер роста на TSI агаре, или
агаре Клиглера, или среде Олькеницкого возможность расщепления мочевины, образования ацетоина,
утилизации цитрата, наличие L-лизин декарбоксилазы и подвижность.
8.5.3.1 Общие положения