ГОСТ Р 54085—2010
Петлей инокулируют специфические среды с 8.5.3.2 по 8.5.3.7 каждой культурой, полученной из
колоний по 8.5.2.
8.5.3.2 TSI агар (5.2.8), среда Олькеницкого или агар Клиглера
Засевают штрихом скошенную поверхность агара и уколом — столбик. Инкубируют при темпера-
туре (37 ± 1)
°
С в течение (24 ± 2) ч.
Интерпретация изменений в среде
а) Столбик
- желтый
- красный или не изменившийся
- черный
- пузырьки или разрывы
глюкозу ферментирует (реакция положительная)
глюкозу не ферментирует (реакция отрицательная)
образование сероводорода
образование газа при ферментации глюкозы
б) Скошенная поверхность
- желтая
лактозу и (или) сахарозу ферментирует (реакция положительная)
- красная или не изменившаяся
лактозу и сахарозу не ферментирует (реакция отрицательная)
Агар Клиглера содержит два сахара (глюкозу и лактозу), поэтому по
скошенной поверхности учитывают ферментацию только лактозы
7
Типичные культуры бактерий рода Shigella показывают щелочную (красную) скошенную поверх-
ность и кислый (желтый) столбик без образования газа (пузырьков), сероводород (черный агар) не об-
разуется.
Отношение выделенных культур к бактериям рода Shigella не может основываться только на ре-
зультатах теста на TSI агаре или агаре Клиглера, или среде Олькеницкого.
Дальнейшему испытанию подвергаются бактерии, показавшие типичные характеристики на TSI
агаре или на агаре Клиглера, или среде Олькеницкого.
При снятии результатов роста выявленных бактерий на трехсахарном агаре (агаре Клиглера, сре-
де Олькеницкого) учитывают типичный рост для бактерий рода Salmonella, руководствуясь требования-
ми ГОСТ 52814. Если подобный рост бактерий обнаружен, то дальнейшее испытание проводят с учетом
возможного присутствия бактерий рода Salmonella.
8.5.3.3 Агар с мочевиной (агар Кристенсена) (5.2.9)
Культуры пересевают штрихом на поверхность агара Кристенсена с мочевиной. Посевы инкуби-
руют при температуре (37 ± 1)
°
С в течение (24 ± 2) ч, наблюдая за посевами через определенные про-
межутки времени.
При положительной реакции, расщеплении мочевины с выделением аммония, цвет фенолового
красного изменяется от розового до сильного светло-вишневого.
Для уреазоположительных бактерий реакция в основном становится видимой после 2 ч инкуби-
рования.
Бактерии рода Shigella мочевину не расщепляют.
8.5.3.4 Определение L-лизин декарбоксилазы (5.2.10)
Инокулируют снизу жидкую среду для определения L-лизин декарбоксилазы (5.2.10). Посевы ин-
кубируют при температуре (37 ± 1)
°
С в течение (24 ± 2) ч.
Помутнение и пурпуровый цвет после инкубации указывают на положительную реакцию. Желтый
цвет указывает на отрицательную реакцию.
Бактерии рода Shigella не обладают L-лизин декарбоксилазой (реакция отрицательная).
8.5.3.5 Определение образования ацетоина (реакция Фогес-Проскауера) (5.2.11)
Анализируемую культуру суспензируют петлей в стерильной пробирке, содержащей 3 см
3
VP сре-
ды (5.2.11) или мясо-пептонного бульона с глюкозой (5.2.6).
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1)
°
С в течение (24 ± 2) ч.
После инкубации к посеву прибавляют две капли раствора креатина, три капли спиртового рас-
твора 1-нафтола и две капли раствора гидроокиси калия, содержимое пробирки перемешивают после
прибавления каждого реактива.