ГОСТ Р 51604-2000
случае толщина фиксируемых образцов не должна превышать 15мм. Фиксация осуществляется при
температуре от минус 6 до минус 20 "С. Объем спирта должен превышать объем фиксируемого
образна не менее чем в 20 раз.
8.1.3 Ускоренной фиксации подвергают образны при проведении экспресс-анализа, который
позволяет получить результаты в течение 1 ч. Однако следует учитывать, что при этом виде
подготовки материала к исследованию происходит частичная деформация и микроструктурные
изменения отдельных компонентов продукта. Вследствие этого необходимо с особой осторожнос
тью подходить к интерпретации получаемых количественных результатов.
8.1.4 При проведении экспресс-анал иза перед фиксацией из каждого отобранного образца
вырезают кусочки размером 15 х 15x4 мм. Вырезанные кусочки мяса или продукта помешают в
небольшую колбу, заливают 4—5 объемами 10 %-го нейтрального раствора форманта и подогре
вают на пламени горелки, не доводя до кипения. При появлении пузырьков газа подогрев
прекращают, содержимое осторожно встряхивают и снова подогревают до появления пузырьков
газа. Так повторяют 3—4 раза.
8.1.5 Образец, фиксированный вдостаточной степени, должен бытьравномерноуплотненным
и иметь одинаковый вид как на внешней поверхности, так и на свежем разрезе.
8.2 Промывка образцов
8.2.1 Зафиксированные образны или их кусочки (обычная и ускоренная фиксация) помешают
в колбочку или стакан и через вставленную стеклянную воронку промывают холодной проточной
водой в течение 15 мин. В том случае, когда материал достаточно плотный, его сразу же после
промывки можно резать на замораживающем микротоме.
8.3 Уплотнение образцов
8.3.1 Для получения срезов необходимого качества из мясопродуктов высокой рыхлости
используют их уплотнение в желатине. При этом после завершения фиксации образца из него
вырезают кусочки объемом не более 3 см3, которые уплотняют в желатине.
Хорошо промытые кусочки пропитывают 12,5 %-м раствором желатина втечение до 6 ч, потом
25 %-м распюром желатина до 24 ч в термостате при температуре 37 *С. Затем кусочки расклады
вают в чашки Петри, заливают их свежим 25 %-м раствором желатина и быстро охлаждают в
холодильнике. После охлаждения вырезают блоки, которые уплотняют в 20
%-м
растворе
форма лина втечение 12 ч. Перед резкой на микротоме блоки промывают как в 8.2. Хранят блоки
в 10 %-м растворе формалина при комнатной температуре в течение 3 лет.
8.4 Изготовление срезов
8.4.1 Из фиксированных образцов вырезают кусочки размером 15 х 15x4 мм таким образом,
чтобы в него вошли внешняя поверхность первичного образца, а также нижележащие слои на
глубину 15 мм. Кусочки для дальнейшей обработки из глубоких слоев образца также должны быть
размером 15х 15x4 мм. Кусочки помешают в микротом, замораживают и изготавливают срезы
толщиной от 10 до 30 мкм.
8.4.2 С микротомного ножа с помощью тонкой кисточки срезы переносят в кристаллизаци
онную чашку или чашку Петри с водопроводной водой. Под неповрежденный срез быстро подводят
предмелюе стекло, обработанное яичным белком с глицерином. Срез извлекают из воды на
середину стекла, удерживая его там препаровальной иглой. Затем срез накрывают сухой фильтро
вальной бумагой и, прижимая бумагу ребром ладони, наклеивают его на предметное стекло. После
того как фильтровальную бумагу убирают, срез должен быть неповрежденным.
8.5 Окрашивание срезов
8.5.1 Окрашивание гематоксилин-эозином (общая окраска).
На первом этапе срезы окрашивают квасцовым гематоксилином Эрлиха в течение 3—4 мин и
промывают 2 мин в воде. Для удаления избытка гематоксилина срезы опускают в 1 %-й раствор
соляной кислоты (солянокислая вода) до появления розовой окраски, затем в аммиачную воду до
появления синего окрашивания и промывают водой в течение 2 мин. Докрашивают срезы I %-м
водным раствором эозина в течение 1 мин и ополаскивают водой. После этого срезы заключают
под покровное стекло. Результаты окраски: в животных тканях ядра клеток темно-синие, цитоплаз ма
принимает различной интенсивности и оттенка красные тона. Врастительных тканях выделяются
клеточные оболочки, цитоплазма светлая.
8.5.2 Окрашивание Суданом HI, IV для выявления жира
Срезы выдерживают в 70 %-м спирте втечение 0,5—1мин. После помещают в свежепрофильт-
рованный красящий раствор Судана до 25 мин. ’Затем ополаскивают в 70 %-м спирте от I до 5 с.
Окрашенные таким образом срезы докрашивают гемагоксилин-эозином в соответствии с 8.5.1.
1775