ГОСТ Р ИСО 10993.5-99
ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)
Исследование на токсичность на суспензионной кратковременной культуре подвижных клеток
1
А.I Приготовление вытяжек
А. 1.1 Готовят вытяжки из конкретных изделии согласно нормативной документации.
А.2 Исследование на токсичность
А.2.1 Оборудование и реактивы
Для проведения исследования применяют.
- стенд для исследований (АЛ);
- пробирки с притертой пробкой. 10 шт., объемом по 2 мл;
- дозатор пипегочиый объемом 0.2; 0,1 мл;
- весы аналитические с погрешностью взвешивания не более 0,001 г;
- пинцет анатомический длиной 250 мм;
- сосуд Дьюара. 2 шт.
- термостат с максимальной температурой 50 ’С;
- глюкоза. ч_д.а;
- натрий лимоннокислый грехзнмещениый. ч.дд»;
- сперма быка (замороженная в жидком азоте), используют в качестве суспензионной кратковременной
культуры подвижных клеток.
АЛЛ В течение эксперимента температура растворов должна быть (40 ± 1,5) ‘С.
АЛ.З Для определения индекса токсичности опытного раствора его сравнивают с отрицательным конт
рольным раствором (далее —контрольным раствором). В качестве контрольного раствора выбирают тлкжозо-
цнграгную среду (глюкоза —4 г, цитрат натрия — 1 г. дистиллированная вода — 100 мл).
Контрольный раствор одновременно является разбавителемдля оттаивания замороженной спермы. Опыт-
ным раствором является вытяжка из изделия, доведенная до изотонии глюкозой и цитратом (глюкоза — 4 г.
цитрат натрия — 1г. вытяжка — 100 мл). Контрольный и опытный растворы по 0,4 мл помешают в пробирки
с притертыми пробками и ставят в водяную баню при температуре (40 ± 1,5) С. Контрольный и
опытный растворы приготавливают заранее, за 1 ч до начата эксперимента.
А.2.4 Опаивают замороженную сперму. Дозируют в пробирки по 0Л или 0,4 мл разбавителя и ставят их
в водяную баню при температуре (40 ± 1,5) "С. Охлажденным до температуры жидкого азота анатомическим
пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы н опускают в натрстый раствор. Не допускается опаи
вать несколько гранул в одной пробирке!
Сразу после размораживания содержимое пробирок сливают водну пробирку, тщательно перемешивают
и получают маточный раствор спермы.
АЛЛ Для приготовления рабочих образцов впробирки с контрольным и опытным растворами помещают
по 0,1 мл маточною раствора спермы.
А.2.6 Рабочие образны переносят в кюветы (капилляры). Кювету устанавливают в кюветодержатель (ка
ретку) и помещают а стенд АЛ.
А.2.7 Накапливают экспериментальные данные. При достижении нулевых значений показателя подвиж
ности зо всех кюветах прекращают процесс накопления данных.
А.2.8 Обрабатывают экспериментальные данные с помощью компьютера.
Для каждой пробы рассчитывают средневзвешенное время подвижности / (. условн. ед.
i)
’с = |п*«■
где т —/-с значение показателя подвижности;
i —текущий номер оценки показателя подвижности.
Для контрольной и опытной выборок образцов вычисляют среднее арифметическое значение и среднее
квадратическое отклонение, по которым в свою очередь рассчитывают для каждой выборки коэффициент
вариации С, %, по формуле
С = ! г 100,
где 8 —среднее квадратическое отклонение;
х —среднее арифметическое значение.
8