ГОСТ Р 70296—2022
11.6.3 В ячейки двух следующих граф электронной таблицы вносят значения пороговых циклов
Ct, полученные по 11.2. Одна графа содержит значения Cf для видоспецифичной ДНК, другая графа —
значения для ВК. В соответствующие ячейки каждой строки вносят значения Ct, полученные в
отдель ной пробирке.
11.6.4 В следующей графе в каждой ячейке вычисляют разницу значений dCt между Ct
видоспецифичной последовательности и Cf ВК. Дляэтого вячейке вводятзнак «=», послеэтогоуказывают
адрес ячейки той же строки, в которой содержится значение Ct видоспецифичной последовательности,
затем ставят знак «-», далее указывают адрес ячейки той же строки, содержащей значение Ct ВК.
11.6.5 Затем в трех следующих столбцах для каждой пары повторностей, сделанных для кали
бровочных и испытуемых образцов, в каждой ячейке вычисляют среднее значение dCt, среднеквадра
тичное отклонение (СКО) и коэффициент вариации (RSD). Среднее значение и среднеквадратичное
отклонение вычисляют при помощи соответствующих встроенных функций электронной таблицы,
«AVERAGE» и «STDEV»1). Для выполнения вычисления в ячейку ставят знак «=», затем обозначе ние
встроенной формулы, далее в скобках указывают диапазон ячеек, в которых находятся значе ния dCt
для повторностей. Коэффициент вариации RSD является модулем отношения стандартного
отклонения к среднему значению dCt. Для вычисления модуля используют встроенную функцию «ABS»
электронной таблицы.
11.6.6 Для калибровочных стандартных образцов создают отдельную дополнительную таблицу
на том же листе электронной таблицы. Данная таблица содержит 4 графы и 4 строки, включая заголовок.
Первые три графы содержат информацию о наименовании каждого калибровочного стандарта,
цифровом значении содержания ДНК животного (кур, быка домашнего, свиньи, лошади) в процентах
каждого стандарта, десятичным логарифмом этого значения LG(%). Десятичный логарифм вычисляют
при помощи встроенной функции «LOG10» электронной таблицы. В четвертую графу вносят рассчитан
ные по 11.6.5 средние значения dCt для каждого калибровочного стандартного образца.
11.6.7 По двум графам дополнительной таблицы для калибровочных стандартных образцов,
содержащих значения LG(%) и средних значений dCt, в отдельной ячейке вычисляют квадратичный
коэффициент корреляции Пирсона R2. Для этого используют соответствующую встроенную функцию
«RSQ» электронной таблицы.
11.6.8 Для каждого среднего значения dCt испытуемых образцов в отдельной графе вычисляют
десятичный логарифм LG (% ДНК), используя встроенную функцию «TREND» электронной таблицы.
Функция «TREND» вычисляет эти значения по методу наименьших квадратов в соответствии с
линейным трендом, используя два массива калибровочных значений из дополнительной таблицы, где в
качестве зависимой переменной у служат значения LG(%), а в качестве зависимой переменной х
служат средние значения dCt.
11.6.9 В отдельной графе на основании полученных значений LG(% ДНК) для каждого среднего
значения dCt испытуемых образцов вычисляют значение содержания ДНК животного в процентах,
возведя 10 в степень, равную LG(% ДНК). Для этого используют встроенную функцию «POWER»
электронной таблицы, где в качестве степени служит значение LG(% ДНК), а число, возводимое в сте
пень, равно 10.
11.6.10 Результаты полуколичественной оценки считаются достоверными, если:
- коэффициент корреляции R2 не менее 0,97. Если коэффициент корреляции R2 менее 0,97,
необходимо повторить амплификацию всех испытуемых проб и калибровочных стандартных образцов;
- коэффициент вариации (RSD) для двух повторов не должен превышать 25 % от среднего значе
ния dCt. Если RSD для пробы превышает 25 %, необходимо повторить амплификацию таких анализи
руемых проб в сочетании с калибровочными стандартными образцами. Если RSD для калибровочных
стандартных образцов превышает 25 %, необходимо повторить амплификацию всех проб в сочетании с
калибровочными стандартными образцами.
11.7Интерпретация результатов
11.7.1 Интерпретацию результатов полуколичественной оценки содержания ДНК кур проводят со
гласно таблице 14.
1) Обозначение встроенных формул приведено для электронной таблицы OpenOffice Calc. Данная информа
ция приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.
12