ГОСТ Р 70296—2022
ей, что определяет наличие или отсутствие для данной пробы значения Ct в соответствующей графе
таблицы результатов.
11.3Учет результатов ПЦР начинают с оценки результатов амплификации ДНК контрольных
образцов в соответствии с таблицей 13. Результаты ПЦР исследования считаются достоверными, если
получены правильные результаты для положительного и отрицательного контролей амплификации и
отрицательного контроля выделения ДНК.
Таблица 13 — Необходимые показатели результатов анализа контролей
Контролируемый
этап анализа
Значение порогового цикла
Ct
по каналу, соответствующему
фрагменту гена
курицы
Rarresl
(канал Yellow)
фрагменту гена
быка домашнего
RPL6
(канал
Orange)
фрагменту гена
свиньи
Рор1
(канал Green)
фрагменту гена
лошади
RPS6
(канал Yellow)
внутреннему
контролю (канал
Red)
Выделение ДНК,
Кв
Отсутствует
Отсутствует
Отсутствует
Отсутствует
Отсутствует
ПЦР, К-
Отсутствует
Отсутствует
Отсутствует
Отсутствует
Отсутствует
ПЦР, К+
<26
<26
<31
<26
<26
11.4 Результаты анализа считаются недостоверными в следующих случаях:
- для положительного контроля ПЦР (К+) среднее значение Ct отсутствует или превышает
значение, указанное в таблице 11. Это происходит в случае неправильного выбора программы ампли
фикации и/или других ошибок, допущенных на этапе постановки ПЦР. При таких результатах необходи мо
повторить амплификацию для всех образцов;
- для отрицательного контроля выделения ДНК (Кв) и/или для отрицательного контроля ПЦР (К-)
на любом из каналов появление значения Ct. Вероятна контаминация лаборатории продуктами ампли
фикации или контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить
ПЦР-исследование для всех образцов, начиная с этапа выделения ДНК;
- для анализируемой пробы среднее значение Ct в таблице результатов составляет более 31
для внутреннего контроля, более 31 для видоспецифичных генов Rarresl, RPL6, и RPS6, более 35 для
видоспецифичного гена Рор1. Необходимо повторить ПЦР-исследование соответствующего образца,
начиная с этапа выделения ДНК. При повторном получении аналогичного результата содержание
ДНК млекопитающих или птиц в образце признается ниже предела аналитической чувствительности
данного метода.
11.5 При проведении полуколичественной оценки содержания ДНК кур может отсутствовать зна
чение Ct в таблице результатов по каналу Yellow (видоспецифичный ген Rarresl). Отсутствие значений Ct
по каналу Yellow для анализируемых проб, в которых ранее качественно подтверждено наличие ДНК кур,
свидетельствует о возможном присутствии в образце яиц или яичных продуктов. Мясо кур (про дукты
убоя) отсутствует.
11.6 Расчет содержания ДНК животного (курица, бык домашний, свинья, лошадь) в
анализируемых пробах
11.6.1 Расчет содержания ДНК животного (% ДНК) относительно общего количества ДНК в
анализируемых пробах проводят при помощи электронной таблицы1).
11.6.2 В первую графу электронной таблицы вносят условные обозначения каждой пробирки.
Каждая строка соответствует отдельной пробирке.
1) Вкачестве электронной таблицыдопускается использовать Microsoft Excel, OpenOffice Calc, таблицы Goo
gle. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. Допускается использова
ние для расчета готовых файлов-шаблонов.
11