ГОСТ 30712-2001
Метол прямого посева - для соковых напитков с мякотью плода и загустителями, концентратов
для напитков в потребительской таре, квасе брожения.
Анализ проводят вдвух повторностях.
6.3.1.1 Метод мембранной фильтрации
Нормируемый объем пробы напитка (100 см’), отобранной по 3.1, фильтруют по 5.4. Фильтр
укладывают на авизованную селективную среду Эндо, приготовленную по 5.3.3. рахтитую в чашки
Петри по ГОСТ 26670.
При посеве методом мембранной фильтрации освобождение от двуокиси углерода и нейтрализа
цию напитка не проводят.
6.3.1.2 Метод прямого посева
Посев продукта проводят в жидкую селективную среду Кесслер с лактозой, приготовленную по
5.3.2. Соотношение между количеством высеваемого продукта и питательной средой 1:9, а для среды
двойной концентрации 1:1.
Перед посевом напитка в среду Кесслер его освобождают от двуокиси углерода по ГОСТ 26669
(2.6.8) и нейтрализуют стерильным раствором гидроокиси натрия для предотвращения резкого сниже
ния pH среды Кесслер (на 0,5 и более).
Значение pH среды Кесслер при посеве в нее продукта доводятдо допустимых значений стериль
ным раствором гидроокиси натрия или при приготовлении среды pH устанавливают выше заданногос
учетомего последующего значения при внесении продукта. Количество добавляемого раствора
гидро окиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить pH при приготовлении
питательной среды, устанавливают опытным путем.
6.3.1.2.1 Нормируемый объем пробы напитка (100 см3) засевают в среду Кесслер с лактозой
двойной концентрации, рахтитую по 100 см5во флаконы с поплавком.
6.3.1.2.2 Нормируемый объем пробы концентрата для напитка в потребительской таре (I г/см’)
помешают в пробирку с 9 см ’стерильной питьевой воды, перемешивают и засевают в пробирку с
10 см ’ среды Кесслер двойной концентрации с поплавком.
6.3.1.2.3 Квас брожения, приготовленный на чистых культурах, в количестве 1.0 см3(нормируе
мый объем) засевают в пробирку с 9 см ’ среды Кесслер с поплавком.
6.3.1.2.4Для посева кваса брожения, приготовленного на хлебопекарных дрожжах, делают разве
дение по ГОСТ 26669: 1см’ кваса разводят в 9 см’ стерильной питьевой воды (разведение 1:10). Из
разведения берут 1см3(что соответствует нормируемому объему кваса —0,1 см’), засевают в пробирку с
9 см3среды Кесслер с поплавком.
6.3.1.3 Посевы на средах Эндо и Кесслер инкубируют при температуре (36 ± 1)*С втечение
24 —48 ч. Чашки Петри с посевами инкубируютдном вверх. Посевы просматривают через (24 ± 3) ч,
отмечают положительные результаты посевов в среду Кесслер, а окончательный учет проводят
через (48 ± 3) ч.
Положительными результатами посева в среду Кесслер считают посевы, в которых имеет место
интенсивный рост микроорганизмов, прояатяюшийся в помутнении среды, образовании газа.
6.3.1.4 Для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на среде Кесслер, к
колиформным бактериям делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность среды Эндо, приготовлен
ную по 5.3.3. Посевы инкубируют при температуре (36 ± 1) “С в течение (24±3) ч.
6.3.1.5 Посевы на среде Эндо по 6.3.1.1 и 6.3.1.4 посте инкубирования просматривают и отмечают
рост типичных колоний для бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) - красных
с металлическим блеском или без него, розовых и бледно-розовых. Типичные колонии для
колиформ-ных бактерий имеют отпечаток на обратной стороне фильтра или на среде Эндо после
снятия петлей колонии. Для повышения дифференцирующих свойств среды Эндо (проявления
отпечатков) в нее добавляют 5
%-й
спиртовый раствор основного фуксина по 5.2.3.
6.3.1.6 При обнаружении на чашках со средой Эндо мелких бесцветных колоний, подозритель
ных на возбудителей кишечных инфекций, микробиологлаборатории должен указанные чашки пере
дать влабораторию санитарно-эпидемиологической станции для дальнейшего изучения по ГОСТ
30519.
6.3.1.7 При необходимости подтверждения принадлежности выросших колоний микроорганизмов
на среде Эндо к колиформным бактериям из колоний приготовляют препараты, окрашивают по Граму
и микроскопнруют.
Для приготовления препарата на чистое и охлажденное после фламбирования предметное стекло
наносят петлей минимальное количество культуры из исследуемой колонии, не размешивая в воде.
Затем вносят петлей каплю реактива 1. приготовленного по 5.2.1. Смесь распределяют на участке
площадью примерно 1 см2, просушивают при 20 *С и фиксируют, медленно пронеся предметное
8
208