ГОСТ 33918—2016
Для получения суспензии с нужной концентрацией контрольного штамма микроорганизма выпол
няют серийные разведения полученной стандартной суспензии методом десятикратных разведений.
В соответствии с выбранной степенью разведения культуры контрольного штамма микроорганиз
ма отбирают необходимое количество пробирок и вносят в каждую пробирку по 4.5 см3 стерильного
разбавителя.
В первую пробирку, содержащую 4.5 см3разбавителя, не касаясь стенок пробирки и поверхности
разбавителя, стерильной пипеткой вносят 0,5 см3суспензии культуры контрольного штамма микроор
ганизма. содержащую 1*10* клеток/см3 и тщательно перемешивают пипетированием. Пипетирование
следует проводить новой стерильной пипеткой либо суспензию можно перемешать с помощью пере
мешивающего устройства. Полученное первое разведение в 1см3содержит 0,1 см3исходной культуры
контрольного штамма микроорганизма (разведение в 10 раз — 10 ’). В следующую (вторую) пробирку,
также содержащую 4,5 см3разбавителя, не касаясь стенок пробирки и поверхности разбавителя, новой
пипеткой вносят 0.5 см3хорошо перемешанного первого разведения. Смесь тщательно перемешивают
пипетированием. Получаем второе разведение, в 1 см3этой суспензии содержится 0.01 см3 исходного
образца (разведение в 100 раз — 10’2).
Процедуру приготовления разведений продолжают по схеме (см. рисунок 1) до получения суспен
зии с необходимым показателем разведения.
0.5 см3
0.5 см30.5 см3
0.5 см3
1
0.5 см3
1
1
0,5 см3
1
0.5 см3
1
Рисунок 1— Схема разведения и высева культуры контрольного штамма микроорганизма
Для контроля правильности приготовления суспензии, правильности выполнения разведений и
расчета заражающей дозы проводят контрольный высев.
Для контроля разбавления из шестого и седьмого разведений высевают по 0.1 см3суспензии пря
мым поверхностным посевом на чашки (пробирки) с питательным агаром. Из каждого разведения де
лают по три таких посева. После высева чашки (пробирки) с разведениями немедленно переносятся
в холодильник. Чашки (пробирки) с посевами инкубируют в термостате при (36
±
1) °С в течение 18—24
ч.
В день исследования для каждой серии посевов подсчитывают среднее число колоний, выросшее
на трех чашках (пробирках). При правильно выполненном разведении среднее количество колоний,
выросших при посеве 0.1 см3суспензии контрольного штамма микроорганизма из шестого разведения,
должно составлять примерно 100 КОЕ. Соотношение полученных средних значений при посеве из
ше стого и седьмого разведений должно быть близко к 10:1. В случае, если концентрация
микроорганиз мов в разведениях значительно отклоняется от расчетной и/или не соблюдена
кратность разведения, данный инокулят контрольного штамма микроорганизма непригоден для
дальнейшего использования. Подготовку инокулята необходимо повторить.
Приготовленные суспензии можно использовать, если они были охлаждены сразу же после при
готовления и проведения контрольных высевов и хранились не более 24 ч. Перед исследованием ино
кулят следует тщательно перемешивать, чтобы добиться однородности суспензии микроорганизмов.
8