ГОСТ ISO 22160—2015
4 Реактивы
В ходе анализа используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если не уста
новлены другие требования, и дистиллированную, деминерализованную воду или воду эквивалентной
чистоты.
4.1 Субстрат нехемилюминосцентного эфира диоксетана [0,2моль/л 3-(2’-спироадамантанан)-
4-метокси-4-(3"-фосфат фенил-1,2 диоксетана дииатриевой соли в DEAE-буфере с 1 % флуорозина]
имеется в продаже [например, жидкий реактив Charm АР® 1)].
Рекомендуется хранить субстрат при температуре 0 X — 7 X . При хранении в пластиковых про
бирках янтарного цвета и при температуре 4 X субстрат остается стабильным в течение 6 мес. При
хранении при температуре 30 "С субстрат сохраняет стабильность только в течение 24 ч.
При испытаниях используемый субстрат хранят при температуре 0 X — 7 °С или во льду.
4.2 Останавливающий раствор
Останавливающий раствор подготавливают, смешивая одинаковое количество 0.15 моль/л
2-амино-2-метил-1-пропанола и 0,02 % бензалкония хлорида с pH 10.7. До использования останав
ливающий раствор должен находиться при комнатной температуре 18 X — 24 X . Для проверки
ста бильности раствора, использованного при градуировке, если не используют термозонд,
фиксируют и поддерживают температуру в пределах 0,5 X .
При ме ч а ни е — Останавливающий раствор используют для остановки ферментного гидролиза субстрата
эфира диоксетана (4.1).
Имеющийся в продаже останавливающий раствор имеет срок годности 1 год при хранении при
температуре 4 X или 2 мес при хранении при комнатной температуре. При ежедневном использовании
его рекомендуется хранить при комнатной температуре.
4.3 Рабочие градуировочные средства, например градуировочные таблетки (сухое пастеризо
ванное молоко с измеренным содержанием фосфатазы в виде таблеток для регидратации в молоке) с
активностью фосфатазы 875 ± 26 мкЕд/л. Таблетки дегидратируют в трех различных объемах напитка
на основе молока, не содержащего активной фосфатазы, или в отрицательной пробе для испытания
(7.2) для создания стандартной градуировочной кривой.
Имеющиеся в продаже градуировочные таблетки хранят при температуре 4 X в течение 2 лет.
4.3.1 Градуировочные средства для жидких неокрашенных молочных продуктов
В каждой из трех пробирок (5.9) вместимостью 50 мл с отметкамиА ,, В, и С, соответственно рас
творяют одну градуировочную таблетку в 100 мкл дистиллированной воды.
В пробиркуА, добавляют 20 мл, в пробирку В, — 5 мл, в пробирку Сп— 2,5 мл жидкого молочного
продукта белого цвета (не содержащего активной фосфатазы) или отрицательную пробу для испыта
ния (7.2). Получают градуировочные стандарты Av В, и С, с активностью фосфатазы А, = 44 мЕд/л, В,
= 175мЕд/л и С, = 350 мЕд/л соответственно. Пробирки закрывают колпачками и энергично встря
хивают их содержимое. Для регидратации содержимого пробирки выдерживают ее в холодильнике в
течение 10 мин. Тщательно перемешивают перед применением.
4.3.2 Градуировочные средства для сливок и ароматизированного молока
В каждой из трех пробирок (5.9) вместимостью 50 мл с отметкамиА2, В2и С2соответственно рас
творяют по одной градуировочной таблетке в 100 мкл дистиллированной воды.
В пробиркудобавляют 10 мл. в пробирку В2— 5 мл, в пробирку С2 — 2.5 мл сливок или аро
матизированного молока (не содержащих активной фосфатазы) или отрицательную пробу для испы
тания (7.2). Получают градуировочные стандарты А2, В2и С2с активностью фосфатазы= 88 мЕд/л,
В2 =175 мЕд/л и С2 = 350 мЕд/л соответственно. Пробирки закрывают колпачками и энергично встря
хивают их содержимое. Для регидратации содержимого пробирки выдерживают ее в холодильнике в
течение 10 мин. Тщательно перемешивают перед применением.
4.4 Положительная контрольная проба
В качестве положительной контрольной пробы используют лиофилизированную щелочную фос
фатазу в колбе янтарного цвета вместимостью 15 мл. Положительную контрольную пробу регидрати-
0 Реактивы, указанные в разделе 4. и оборудование, указанное в 5.1, доступны у I Charm Sciences Inc.,
659 Andover SI.. Lawrence, MA 01843. USA (США). Они являются примерами подходящих продуктов, доступных в
продаже. Эта информация приводится для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой
указанных продуктов со стороны ISO или IDF. Могут быть использованы эквивалентные продукты, если они обе
спечивают получение аналогичных результатов.
2