ГОСТ ISO 22160—2015
8.4.4 Выбирают соответствующий канал люминометра. отградуированныйдля рабочей пробы для
анализа. Через 3 мин в течение 15с добавляют дозатором с фиксированным объемом (5.4) 1.0 мл оста
навливающий раствор (4.2).
8.4.5 Вынимают мини-пробирки из инкубатора. Закрывают каждую пробирку колпачком. Энер
гично встряхивают каждую пробирку в течение 5 с. Снимают колпачки и прикрепляют адаптер люми
нометра. если это необходимо. Помещают каждую пробирку в люминометр (5.1). Начинают анализ
люминометром и записывают показания после звуковых сигналов люминометра. Повторяют подсчет с
каждой пробиркой. Разводят любую пробу для испытания со значением выше 7000 мЕд/л и проводят
испытание повторно.
П р и м е ч а н и е — При остановке ферментной реакции определение светоотдачи в течение 3 мин будет
стабильным при температуре 18 ’С — 24 "С. Показания люминометра выражают в миллиединицах активности
фермента на литр.
8.5 Контроль термостойкой микробной щелочной фосфатазы
Если определение (8.4) дает положительный результат (£350 мЕд/л обычно указывает на непра
вильно пастеризованные пробы), то действуют следующим образом. В мини-пробирку добавляют 1 мл
другой рабочей части пробы (7.1.1—7.1.4) и нагревают ее в инкубаторе (5.7) или водяной бане (5.8) при
63 4С. Выдерживают при этой температуре в течение 30 мин. а затем быстро охлаждают. Определяют
любую остаточную активность фосфатазы, как указано в 8.4.
Любая остаточная активность обусловлена наличием термостойкой микробной щелочной фосфа
тазы. Если определение нагретой пробы для анализа составляет примерно 30 % от его первоначально го
определения, то вся активность фосфатазы является микробной.
9 Расчет и представление результатов
9.1 Общие сведения
Результаты рассчитывают с использованием встроенного в люминометр (5.1) программного обе
спечения. Расчеты с использованием показаний с других люминометров можно осуществлять вручную с
помощью калькулятора.
Если результаты будут рассчитаны вручную, поступают согласно 9.2.
9.2 Расчет вручную
Записывают значение ОСЕ (относительных световых единиц) рабочих градуировочных растворов
А. в и С (4.3) и отрицательной пробы (7.2) и средние полученные результаты (8.1.1—8.1.13).
Рассчитывают активность щелочной фосфатазы с использованием линейной регрессии от
носительных световых единиц отрицательной контрольной пробы и градуировочных растворов А. В и
С. а также взаимодействующую заданную активность щелочной фосфатазы в миллиединицах на литр
(например, отрицательная контрольная проба = 5 мЕд/л. Д, = 44 мЕд/л или А2 = 88 мЕд/л, 8, и В2=
175 мЕд/л и С, и С2 = 350 мЕд/л).
Среднее значение ОСЕ используют в качестве координаты у. а заданное значение в миллиедини
цах на литр — в качестве координаты х. Рассчитывают угловой коэффициент т и у-отсекаемый отрезок
b из лучшего подбора прямой по формуле
у = тх + Ь,
(13)
где х — активность щелочной фосфатазы пробы. мЕд/л;
т — числовое значение углового коэффициента кривой регрессии:
у — числовое значение ОСЕ люминометра;
b — числовое значение отсекаемого отрезка для получения значения х.
С применением рассчитанных значений т и b определение единицы активности фермента рабо
чей части пробы можно выполнять, используя измеренные значения ОСЕ как значение у и рассчитывая
х. мЕд/л. с помощью формулы
„У ~ Ь
(14)
9.3 Выражение результатов
Результаты испытания выражают с точностью до целых чисел в миллиединицах на литр.
9