ГОСТ ISO 6785—2015
9.5 Подтверждение
9.5.1 Выбор колоний для подтверждения
Из каждой пластинки с каждой селективной плотной средой (9.4.1) выбирают пять типичных или
предполагаемых колоний. Если имеется менее пяти таких колоний, для подтверждения берутвсеимею
щиеся колонии.
9.5.2 Инкубирование
Осуществляют посев штрихами отобранных колоний на поверхность пластинки с питательным
агаром (5.2.6) так. чтобы обеспечить развитие хорошо изолированных колоний. Инкубируют пластинки в
термостате (6.3) при температуре 37 °С в течение 18—24 ч.
После инкубирования в термостате для биохимического и серологического подтверждения
отбирают чистые, хорошо изолированные колонии.
9.5.3 Биохимическое подтверждение
9.5.3.1 Общие положения
Инкубируют чистыми колониями (9.5.2). осуществляя посев петлей в среды, указанные в
9.5.3.2—9.5.3.7.
9.5.3.2 Трехсахарный железистыйагар с железом (5.2.7)
Осуществляют посев штрихами сначала на поверхности, а затем в глубь столбика агара. Инкуби
руют в термостате (6.3) при температуре 37 X в течение 24 ч.
Интерпретируют изменения среды следующим образом:
a) столбик:
- желтый — глюкоза-положительный (ферментация глюкозы):
- красный или без изменений — глюкоза отрицательный (ферментация глюкозы отсутствует):
- черный — образование сероводорода:
- пузырьки или трещинки — образование газа из глюкозы.
b
) скошенная поверхность:
- желтая — лактоза- и/или сахароза-положительнзя (ферментация глюкозы и/или сахарозы):
- красный или без изменений — лактоза- и сахароза-отрицательная (ферментация лактозы и/или
сахарозы отсутствует).
Типичные культуры сальмонелл показывают щелочные (красные) скосы с образованием газа и
кислотные (желтые)столбики (в 90 % всехслучаев)с образованием сероводорода (потемнениеагара).
Если лактозо-положительные сальмонеллы изолированы, то скошенная поверхность TSI желтая.
Следовательно, предварительное подтверждение культур сальмонелл не должно основываться на
результатах только TSI-испытаний.
9.5.3.3 Агар с мочевиной (5.2.8)
Осуществляют посев штрихами на скошенную поверхность агара. Инкубируют в термостате (6.3)
при температуре 37X в течение 24ч. Врезультате положительной реакции при расщеплениимочевины
выделяется аммиак, который изменяет окраску фенолового красного на светло-розовую, а затем на
темно-вишневую. Реакция проявляется через 2—4ч.
9.5.3.4 L-лизиндекарбоксилазная среда (5.2.9)
Инокулируют снизу жидкую среду. Инкубируют в термостате (6.3) при температуре 37 X в тече
ние 24 ч.
Фиолетовый цвет, появившийся после роста, показывает на положительную реакцию. Желтая
окраскауказываетна отрицательную реакцию.
9.5.3.5 Реакция р-галактозидазы (5.3.2)
Суспендируют петлей предполагаемую колонию в пробирке (6.9), содержащей 0,25 см3 солевого
раствора (5.3.1).Добавляютодну каплю толуола (5.3.2.1) и встряхивают пробирку. Пробирку помещают
на водяную баню (6.5)при температуре 37 X иоставляют на несколькоминут. Добавляют0,25см3реак
тива {Налактозидазы и перемешивают. Снова помещают пробирку на водяную баню при температуре
37X на 24ч.Желтаяокраскауказываетнаположительную реакцию. Реакциячастостановитсявидимой
через 20 мин.
9.5.3.6 Реакция Фогеса — Проскауэра (5.3.3)
В две пробирки (6.9), содержащие по0.2 см3VP-среды (5.3.3.1), петлей осуществляют посевпред
полагаемой колонии. Одну из пробирок инкубируют при комнатной температуре, а другую в термоста те
(6.3) — при 37 X в течение 24 ч. Затем в каждую пробирку добавляют по 2 капли раствора
креатина (5.3.3.2), три капли спиртового раствора 1-нафтола (5.3.3.3) и 2 капли реактива гидроксида
калия (5.3.3.4). встряхивают после каждого добавления. Изменение розового цвета на ярко-красный в
течение 15 мин указывает на положительную реакцию.
12