ГОСТ 32886—2014
слабом кипении смеси в течение (70
±
10) мин. перемешивая содержимое каждые 10 мин. После
окончания нагрева колбу отсоединяют от холодильника и в еще горячую смесь осторожно добавляют с
помощью мерного цилиндра 20 см3этилового спирта и охлаждают до комнатной температуры, пе
ремешивая содержимое каждые 5 мин. Полученную смесь можно хранить при комнатной температуре в
теченио 24 ч.
4.6.11 Экстракция неомыляемых веществ
4.6.11.1 В грушевидную колбу с полученной по 4.6.10 смесью добавляют 50 см3 толуола или
гексана, закрывают стеклянной пробкой и перемешивают в течение 30 с. Затем содержимое колбы без
ополоскивания переносят в делительную воронку. В делительную воронку добавляют с помощью
мерного цилиндра 55 см3раствора гидроокиси калия молярной концентрацией 1 моль/дм3(см. 4.6.2),
закрывают стеклянной пробкой и сильно встряхивают в течение 10 с. После образования четкой гра
ницы раздела фаз (без слоя эмульсии) нижнюю фазу сливают и отбрасывают. В делительную ворон ку
с оставшейся органической фазой, содержащей раствор неомыляемых веществ в толуоле или гек сане.
добавляют с помощью мерного цилиндра 20 см3 раствора гидроокиси калия молярной концен трацией
0.5 моль/дм3(см. 4.6.3) и осторожно перемешивают содержимое переворачиванием колбы в течение 10
с. не допуская образования эмульсии. После образования четкой границы фаз нижнюю фазу сливают
и отбрасывают. Осторожную промывку органической фазы раствором гидроокиси ка лия молярной
концентрацией 0.5 моль/дм3проводят два раза. Последующую промывку органической фазы проводят
дистиллированной водой порциями по 20 см3, каждый раз сливая и отбрасывая ниж нюю водную фазу.
Промывку первой порцией дистиллированной воды проводят осторожным пере мешиванием. При
промывке последующими порциями дистиллированной воды интенсивность пере мешивания
содержимого колбы постепенно увеличивают. В случае образования стойкой эмульсии добавляют
этиловый спирт. Промывку дистиллированной водой проводят несколько раз до получе ния
совершенно прозрачной (без опалесценции) органической фазы (обычно требуется промывка 7-8
порциями дистиллированной воды).
4.6.11.2 После последней промывки нижнюю водную фазу сливают и отбрасывают, а остав
шуюся органическую фазу сливают через верхнюю часть делительной воронки в коническую колбу
вместимостью 100 см3по ГОСТ 25336, содержащую 7-8 г безводного сернокислого натрия. Колбу за
крывают стеклянной пробкой и выдерживают 10-15 мин. Полученный раствор неомыляемых веществ в
толуоле или гексане можно хранить при комнатной температуре над безводным сернокислым на
трием в течение 24 ч.
4.7 Проведение измерения
4.7.1 В грушевидную колбу вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336 помещают 20 см’ раствора
неомыляемых веществ в толуоле или гексане, полученного по 4.6.11, и выпаривают толуол (или гек
сан) на ротационном испарителе при температуре (40
±
3) °С до образования небольшой капли. Ос
таток растворяют в 5 см3толуола (или гексана) и хроматографируют, вводя в испаритель хромато
графа 1 мм3 полученного раствора.
4.7.2 На хроматограмме проводят разметку пиков холестерина и холестанола согласно прило
жению А и определяют площади этих пиков. Площадь пика холестанола (внутренний стандарт) не
должна отличаться более чем на 50 % от площади пика холестанола. измеренной для рабочего рас
твора В (см. 4.6.7). При необходимости хроматографируемый раствор разбавляют толуолом (или гек
саном) или повторяют операции по 4.7.1, увеличив объем раствора, взятый для выпаривания, или
уменьшив объем толуола (гексана), используемый для растворения остатка после выпаривания.
4.8 Обработка результатов
4.8.1 Массовую долю холестерина X в пересчете на сухое вещество. %. вычисляют по формуле
хг .-к „.у,. •I00ю о
1000-М
Кр ’
<2)
где Свс - массовая концентрация раствора холестанола (внутренний стандарт), добавляемого к про
бе перед омылением липидов (см. 4.6.10.2), мг/см3;
VK - объем раствора холестанола (внутренний стандарт), добавляемого к пробе перед омыле
нием липидов (см. 4.6.10.2). см3;
S»*n - площадь хроматографического пика холестерина;
6