ГОСТ 32886—2014
творов
см3
гексан
Рабочие растворы готовят непосредственно перед использованием.
Т а б л и ц а 1 - Схема дозирования растворов при приготовлении рабочих растворов холестерина
и холестанола
______________________________________________________________________________________
Обозначение
Объемы вносимыхрастворов.
Масса, мг
рабочихрас
Раствор IРаствор II
Толуол или
холестерина т*-.
внутреннегостандарта
(холестанола) m„n
А 1 1 8 10 5
В 1 2 7 10 10
С 1 3 6 10 15
D 1 4 5 10 20
4.6.8 Подготовка газового хроматографа и капиллярной колонки
Подготовку газового хроматографа и капиллярной колонки (кондиционирование колонки) про
водят согласно инструкциям по эксплуатации. Режимы хроматографа при работе с разными типами
капиллярных колонок подбирают так, чтобы качество разделения хроматографических пиков холе
стерина и холестанола соответствовало требованиям, указанным в приложении А.
Рекомендуются следующие режимы работы хроматографа:
- температура детектора - 280 °С;
- температура инжектора - 260 °С:
- программирование температуры термостата колонки: 150 °С в течение 3 мин; нагрев со скоро
стью 15 “С/мин до 260 °С; выдерживание при 260 °С в течение 45 мин;
- давление газа-носителя (азот) в испарителе - 130 к
Л
а:
- деление потока газа носителя в испарителе - 1:30;
- расходы водорода, воздуха и азота (поддув в детектор) устанавливают согласно инструкции к
эксплуатации хроматографа или подбирают путем хроматографирования градуировочных смесей
(см. 4.6.7) для обеспечения максимальной чувствительности детектора ПИД.
4.6.9 Градуировка газового хроматографа
4.6.9.1 Хроматографируют рабочие растворы холестерина и холестанола. приготовленные по
4.6.7. В испаритель хроматографа вводят 1 мм3рабочего раствора. Каждый рабочий раствор хрома
тографируют дважды. На полученных хроматограммах проводят разметку пиков холестерина и холе
станола согласно приложению А. и определяют площади этих пиков.
4.6.9.2 Для каждой полученной хроматограммы рабочих растворов вычисляют градуировочные
коэффициенты К, по формуле:
К _
S
ход
т
вс
*
S
вс
т
хол
(D
ГДе Snv? И Sec — соответственно площади хроматографических пиков холестерина и внутреннего
стандарта (холестанола);
т хал и mtl - соответственно массы холестерина и внутреннего стандарта (холестанола), со
держащихся в рабочем растворе (таблица 1), мг.
За окончательное значение градуировочного коэффициента К принимают среднеарифметиче
ское значение всех измеренных коэффициентов К,, при этом относительное среднеквадратичное от
клонение К, не должно превышать 1 %.
4.6.9.3Хроматографирование пробы и хроматографирование при определении градуировочно
го коэффицонта проводят при одинаковых режимах работы хроматографа и одинаковом способе
разметки хроматографических пиков.
4.6.10 Омыление липидов пробы
4.6.10.1 В грушевидной колбе вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают 1 г жидкого
яичного желтка. 3 г жидкого яичного меланжа. 0.5 г сухого яичного желтка, 0.6-0.7 г сухого яичного
меланжа или сухого яичного желтка с добавками соли и/или гидроколлоидов, приготовленных по
4.6.1. Результаты взвешивания записывают в граммах до четвертого десятичного знака.
4.6.10.2 В грушевидную колбу с пробой добавляют 1 см3 основного раствора холестанола
(внутренний стандарт) массовой концентрацией 10 мг/см3(см. 4.6.6). 20 см3этилового спирта и осто
рожно перемешивают содержимое вращательным движением колбы. Затем добавляют 5 см3раство ра
гидроокиси калия массовой долей 50 % (см. 4.6.4), присоединяют стеклянный холодильник, поме шают
грушевидную колбу в водяную баню или закрепляют ее над электроплиткой и нагревают при
5