ГОСТ 32477—2013
Приложение А
(справочное)
Виды олигохет, рекомендованные для использования в исследовании биоаккумуляции
А.1 Tubifex
tubifex
(MULLER). Tubificidae. Oligochaeta
Трубочник обыкновенный (Tubificidae. Oligochaeta) Tubifex tubifex (MULLER) обитает в пресноводных
донных отложениях в трубчатых норках, которые строит из слизи. Черви зарывают передний конец тела в норки
(трубы), поглощают частицы осадка, питаясь находящимися в нем микроорганизмами и органическими остатка ми.
Задняя часть тела червя обычно выставлена над поверхностью грунта для дыхания. Хотя данный вид олиго хет
обитает во множестве различных типов донных отложений во всем Северном полушарии. Tubifex tubifex
предпочитает субстрат с относительно мелкими размерами частиц [59]. Пригодность данного вида для эко-
токсикологических испытаний описана, например, в [8]. [29]. [31], [39]. [60]. [62]. [63].
Методы культивирования
Для получения достаточного количества Tubifex tubifex для проведения исследования биоаккумуляции
червей необходимо постоянно выращивать в лаборатории. Для культивирования Tubifex tubifex рекомендуется
использовать систему, состоящую из искусственного осадка на основе искусственной почвы в соответствии с [40] и
реконструированной воды в соответствии с [25]. [8].
В качестве сосудов для культивирования могут быть использованы стеклянные контейнеры или контей
неры из нержавеющей стали высотой от 12до 20 см. В каждый контейнер загружают слой сырого искусственного
осадка, приготовленного, как описано в приложении D. Глубина слоя осадка должна обеспечивать естественное
роющее поведение червей (минимальная глубина для Tubifex tubifex - 2 см). В систему добавляют реконструи
рованную воду. Воду следует добавлять осторожно, чтобы не нарушить целостность осадка. Вода аккуратно
аэрируется (например. 2 пузырька в секунду 0.45 мкм профильтрованным воздухом) с помощью пипетки
Пасте ра. установленной на расстоянии 2 см от поверхности грунта. Рекомендуемая температура культуры
составляет (20 ±2 )’С.
Червей вносят в систему для культивирования с максимальной загрузкой 20 000 особей/м*’ поверхности
осадка. Более плотная загрузка может привести к сокращению скорости роста и размножения [43].
В искусственных осадках червей необходимо кормить. Питание состоит из измельченного корма для
рыб.
Пример - Tetra Min
®
может служить в качестве дополнительного питания [8].
Количество корма должно обеспечить достаточный рост и размножение червей и не приводить к накоп
лению аммиака и росту грибка в культуре. Пища может быть внесена два раза в неделю (например. 0.6 - 0.8
миллиграмм на квадратный сантиметр поверхности грунта). Практика показывает, что применение суспензии
корма в гомогенизированной, деионизированной воде может способствовать равномерному распределению пи
щи на поверхности осадка в контейнерахдля культивирования. Чтобы избежать накопления аммиака, поверхно
стную воду необходимо менять автоматически (проточная система) или по крайней мере раз в неделю вручную.
Субстрат для культуры следует заменять каждые три месяца.
Отбор проб червей может осуществляться путем просеивания осадка с культурой через сито с диамет
ром ячеек 1 мм. если требуются только взрослые особи. Для сохранения коконов используют сито с диаметром
ячеек 0.5 мм, а для ювенильных особей - сито с диаметром ячеек 0.25 мм. Сита могут быть помещены в рекон
струированную воду после просеивания осадка. Червей удаляют из сита, они могут быть отобраны из воды с
помощью мятого стального пинцета или пипетки с оплавленными краями.
Для теста или нового культивирования используют только неповрежденные и четко идентифицирован
ные образцы Tubifex tubifex(HanpnMep. [64]). Больных и поврежденных червей, а также коконы, зараженные гриб
ком. необходимо удалять.
Синхронизированная культура гложет служить источником червей определенного возраста в подходящие
промежутки времени, когда это необходимо. Новые сосуды для культивирования устанавливаются в выбранные
интервалы (например, каждые две недели), начиная с организмов определенного возраста (например, коконов). В
условиях культивирования, описанных здесь, черви считаются взрослыми через восемь - десять недель. Ма
точную культуру можно отобрать, когда черви закладывают новые коконы, налример. по прошествии десяти не
дель. Взрослые особи могут быть использованы для теста, после чего запускают новое культивирование.
А.2 Lumbriculus variegatus (MULLER), Lumbriculidae, Oligochaeta
Lumbriculus variegatus (Lumbriculidae. Oligochaeta) также обитает в пресноводных донных отложениях по
всему миру и широко используется в эко-тохсикологических экспериментах. Информация о биологии, условиях
культивирования и чувствительности вида может быть получена из [1].[6],[9].[36]. Lumbriculus variegatus также
может быть культивирован на искусственном осадке, рекомендованном для Tubifex tubifex [8] при определенных
ограничениях. Так. в природе Lumbriculus variegatus предпочитает более грубый субстрат, чем Tubifex tubifex
[59]. лабораторные культуры с искусственным осадком, рекомендуемым для Tubifex tubifex. могут погибнуть
после четырех - шести месяцев. Практический опыт показывает, что Lumbriculus variegatus может содержаться
в пес-
14