ГОСТ 32477—2013
Первый образец следует отбирать по прошествии от 4 до 24 ч после начала фазы выведения,
поскольку в начальный период могут произойти быстрые изменения в тканях. Фазу выведения реко
мендуется прекращать либо когда концентрация исследуемого вещества составляет менее 10 % рав
новесной концентрации, либо по истечении 10 дней - максимальной продолжительности фазы. Оста
точный уровень вещества в червях в конце фазы выведения используется в качестве второй конеч ной
точки. Данный период может регулироваться периодом, в течение которого концентрация иссле
дуемого вещества в червях остается выше аналитг-меского предела обнаружения.
7.3Тестовые организмы
7.3.1Количество тестовых червей
7.3.1.1 Количество червей в одном образце должно соответствовать такой массе тканей чер
вей, чтобы масса исследуемого вещества в образце в начале фазы поглощения и в конце фазы вы
ведения соответственно была значительно выше предела обнаружения для исследуемого вещества
в биологическом материале. В указанных стадиях фаз поглощения и выведения концентрация в тес
товых животных, как правило, относительно низкая [6].[8],[18]. Так как индивидуальный вес у многих
видов водных олигохет очень мал (5-10 мг сырого веса для одного червя для Lumbnculus variegatus
и Tubifex tubifex), черви из одной тестовой камеры могут быть объединены для взвешивания и анали
за исследуемого вещества. Для тестовых видов с большим индивидуальным весом (например,
Branchiura sowerbyi) могут быть использованы повторные пробы, содержащие индивидуальную особь,
но в таких случаях количество проб должно быть увеличено до 5 % для точки отбора проб (11]. Одна
ко следует отметить, что Branchiura sowerbyi не был включен в межлабораторный тест [12]. и поэтому
не рекомендуется для использования в качестве предпочтительного вида в руководстве.
7.3.1.2Следует использовать червей одинакового размера (для Lumbriculus variegatus см.
приложение А). Черви должны быть получены из одного источника и быть взрослыми или крупными
особями одной возрастной группы (см. приложение А). Вес и возраст особи могут оказать существен
ное влияние на величины BAF (например, из-за различного содержания липидов н/или наличия яиц),
эти параметры должны быть точно зарегистрированы. Для измерения среднего сырого и сухого
веса подвыборку червей следует взвесить до начала испытания.
7.3.1.3 Для видов Lumbriculus variegatus и Tubifex tubifex во время тестового периода ожида
ется их воспроизводство. Отсутствие воспроизводства в исследовании биоаккумуляции должно быть
зарегистрировано и учитываться при интерпретации результатов испытания.
7.3.2Загрузка червей
7.3.2.1Высокие соотношения черви-осадок и черви - вода должны быть использованы
для того, чтобы свести к минимуму снижение концентрации исследуемого вещества в осадке во вре
мя фазы поглощения и избежать снижения концентрации растворенного кислорода. Выбранные ве
личины загрузки должны также соответствовать естественной плотности поселения используемого
вида [43]. Например, для Tubifex tubifex рекомендуемые нормы загрузки составляют 1 - 4 мг ткани
червя (живого веса) на грамм сырого осадка (8], (11]. Источники (1] и [6] рекомендуют нормы загрузки
не более 1 г сухого веса ткани червя на 50 г органического углерода в осадке для Lumbriculus
variegatus.
7.3.2.2Черви, которые будут использованы 8 испытании, удаляют из культуры просеива
нием культивационной среды. Червей (взрослых или больших червей без признаков недавней фраг
ментации) переносят в стеклянную посуду (например, чашки Петри), содержащую чистую воду. Если
условия испытания отличаются от условий культивирования, рекомендуется использование 24-
часовой фазы акклиматизации. Перед взвешиванием избыток воды удаляют из червей. Это можно
сделать путем аккуратного размещения червей на предварительно смоченной бумаге. Не рекоменду
ется использовать поглощающую бумагу для высушивания червей, поскольку это может вызвать
стресс или повреждение червей. Рекомендуется использовать невысушенных червей, составляющих
примерно 1,33 целевой биомассы. Дополнительные 33 % соответствуют разнице между высушенным
и невысушенным червем [28].
7.3.2.3В начале фазы поглощения (день 0 испытания) тестовые организмы удаляют из ка
меры акклиматизации и случайным образом распределяют в емкостях (например, чашки Петри), со
держащих реконструированную воду, путем добавления группы из двух червей до тех пор. пока
каж дый сосуд не будет содержать 10 червей. Каждую из данных групп червей затем случайно
переводят в различные тестовые сосуды, например, с использованием мягкого стального пинцета.
Тестовые со суды затем инкубируют в условиях испытания.
7.3.3Кормление
В связи с низким содержанием питательных веществ в искусственном осадке осадок должен
быть кондиционирован за счет источника пищи. Для того чтобы не допустить ошибки воздействия на
8