ГОСТ 32477—2013
8.2.6Если цель конкретного исследования заключается в измерении биодоступности и ис
тинного остатка в тканях тестовых организмов, то по крайней мере подвыборка тестовых организмов
(например, из трех дополнительных репликаций) отбирается во время равновесного состояния. Под
выборка должны быть взвешена, очищена в чистой воде в течение 6 ч (47] и взвешена снова перед
проведением анализа. Данные о весе червя и концентрации вещества в тканях у данной подвыборки
затем могут быть сопоставлены со значениями, полученными из неочищенных червей. Червей, пред
назначенных для измерения выведения, не надо очищать до перевода в чистый осадок для умень
шения дополнительного стресса для организма.
8.2.7Предпочтительно проводить анализ воды, осадка и образцов червей немедленно (то
есть в течение одного - двух дней) после отбора в целях предотвращения деградации или других по
терь. а также рассчитывать примерные скорости поглощения и выведения во время проведения ис
пытания. Немедленный анализ также позволяет избежать задержки в определении момента дости
жения плато.
8.2.8Если невозможно провести анализ немедленно, пробы необходимо хранить в надле
жащих условиях. Информацию о стабильности и надлежащих условиях хранения конкретного иссле
дуемого вещества следует получить перед началом исследования (например, продолжительность и
температура хранения, процедура экстракции и пр.). Если такая информация отсутствует, а ее нали
чие необходимо, контрольные пробы с исследуемым веществом исследуют параллельно для опре
деления стабильности при хранении.
8.3Качество аналитического метода
8.3.1Поскольку вся процедура по существу регулируется точностью, прецизионностью и
чувствительностью аналитического метода, используемого для определения вещества, необходимо
экспериментально проверить, что точность и воспроизводимость результатов химического анализа, а
также извлечения исследуемого вещества из проб воды, осадка и червей подходят для конкретного
метода. Также необходимо удостовериться, что исследуемое вещество не определяется в контроль ных
сосудах в концентрациях выше фоновых. При необходимости значения С*. Csи Саисправляют с учетом
извлечения и фоновых значений в контрольных пробах. Все пробы на протяжении всего испы тания
следует обрабатывать так. чтобы свести к минимуму загрязнения и потери (например, в ре зультате
адсорбции исследуемого вещества на устройстве для отбора проб).
8.3.2Общее извлечение и извлечение исследуемого вещества из организма червя, осадка,
воды и. если используются, из ловушек с абсорбентами для удержания испаряющегося исследуемого
вещества, должны быть зарегистрированы и приведены в итоговом отчете.
8.3.3Поскольку рекомендуется использовать маркированные вещества, можно проводить
анализ на общую радиоактивность (то есть исходные продукты и продукты распада). Однако, если
это аналитически возможно, количественная оценка исходного вещества и продуктов распада в рав
новесном состоянии или в конце фазы поглощения может предоставить важную информацию. Если
планируется проводить такие измерения, пробы должны быть подвергнуты соответствующим проце
дурам экстракции так. чтобы можно было определить отдельно количество исходного вещества. Ко
гда обнаруженные продукты распада представляют значительный процент (например, более 10 %)
радиоактивности, измеренной в тестовых организмах в равновесном состоянии или в конце фазы по
глощения. рекомендуется идентифицировать такие продукты распада (5].
8.3.4Из-за низкой индивидуальной биомассы часто не представляется возможным опреде
лить концентрацию исследуемого вещества в каждом отдельном черве, если не используют вид
Branchiura sowerbyi (40-50 мг сырого веса на одного червя) (11]. Таким образом, объединение орга
низмов в произвольную выборку из данного тестового сосуда является приемлемым, но это не огра
ничивает применение статистических процедур к данному виду. Если конкретные статистические
процедуры и мощность являются важными условиями, то достаточное количество тестовых животных
и/или репликаций для размещения желаемой выборки, обеспечения соответствующей процедуры и
мощности должно быть включено в испытание.
8.3.5Рекомендуется выражать BAF в качестве зависимости от общего живого веса, общего
сухого веса и при необходимости (например, для сильно липофильных веществ) зависимости от со
держания липидов и общего содержания органического углерода в осадке. Для определения содер
жания липидов следует использовать соответствующие методы [48]. [49]. В качестве стандартного
метода рекомендуется экстракция хлороформом/метанолом [48]. [50]. Чтобы избежать использования
хлорсодержащих растворителей, может быть использована международная модификация метода
Блая и Дайера [50]. как описано в [51]. Поскольку различные методы дают неодинаковые значения
[48]. важно подробно знать характеристики используемого метода. Если возможно, то есть при нали
чии достаточного количества ткани червя, содержание липидов измеряют в той же пробе или экстра
гируют так же. как и для проведения анализа исследуемого вещества, поскольку липиды часто долж
ны быть удалены из экстракта при проведении хроматографического анализа (5). Тем не менее целе-
11