ГОСТ 32293-2013
10.5Концентрации исследуемого вещества
Диапазон концентраций, в котором, вероятно, будет наблюдаться воздействие, может быть
определен на основе результатов исследования по подбору диапазона концентраций. Для
заключительного определяющего исследования необходимо выбрать по крайней мере, пять
концентраций, составляющих геометрическую прогрессию со знаменателем, не превышающим 3.2.
Для исследуемых веществ, показывающих пологие кривые отклика, может быть выбран более
высокий коэффициент. Необходимо, чтобы тестируемые концентрации находились в диапазоне,
вызывающем ингибирование скорости роста водорослей в диапазоне от 5 до 75%.
10.6Параллельные и контрольные пробы
10.6.1Предусмотрено использование трех параллельных проб для каждой тестируемой
концентрации. Если не требуется определять NOEC. то количество тестируемых концентраций может
быть увеличено, а количество параллельных проб для каждой концентрации уменьшено. Количество
контрольных проб должно в два раза превышать количество параллельных проб для каждой
тестируемой концентрации.
10.6.2Отдельный набор тестируемых растворов готовят для аналитического определения
концентраций исследуемого вещества.
10.6.3Если для подготовки тестируемого раствора используется растворитель, то готовят
дополнительную контрольную пробу с растворителем в используемой концентрации.
11Проведение тестирования
11.1Подготовка прививочной культуры
11.1.1 Для адаптации исследуемых водорослей к условиям тестирования и гарантии того, что
водоросли находятся в фазе экспоненциального роста при прививании тестируемых растворов,
прививочная культура в питательной среде готовится за 2 - 4 дня до начала тестирования.
11.1.2 Водорослевая биомасса должна быть приспособлена к условиям тестирования так. чтобы
экспоненциальный рост преобладал в прививочном материале до начала тестирования.
11.1.3 Прививочную культуру выдерживают при тех же условиях, что и тестируемые виды.
Измеряют увеличение биомассы в прививочной культуре для проверки того, что скорость роста
находится в пределах нормального диапазона для тестируемого вида в условиях культивирования.
Пример процедуры культивирования морских водорослей описан в приложении С. Для того чтобы
избежать синхронного деления клеток во время тестирования, может потребоваться второй этап
культивирования прививочной культуры.
11.2Подготовка тестируемых растворов
11.2.1Все тестируемые растворы должны содержать одинаковое количество питательной
среды и начальной биомассы. Тестируемые растворы с выбранными концентрациями обычно
готовятся путем перемешивания основного исследуемого вещества с питательной средой и
прививочной культурой. Основные растворы обычно готовятся путем растворения исследуемого
вещества в питательной среде.
11.2.2Растворители, например ацетон, трет-бутиловый спирт и диметилформамид. могут
использоваться в качестве носителей для добавления плохо растворимых веществ к питательной
среде. Концентрация растворителя не должна превышать 100 мл/л, такая же концентрация
растворителя должна быть добавлена ко всем пробам, включая контрольные пробы.
11.3Инкубация
11.3.1Тестовые сосуды укупоривают водонепроницаемыми заглушками. Тестовые сосуды
встряхивают и помещают в аппарат для культивирования. Во время тестирования необходимо
поддерживать суспензию водорослей и стимулировать перенос углекислого газа (0О2) за счет
непрерывного встряхивания сосудов. Температуру тестовых сосудов необходимо поддерживать в
диапазоне от 21 до 24 ± 2°С.
11.3.2Для культивирования видов, отличных от перечисленных в приложении А. например
тропических видов, могут быть необходимы более высокие температуры при условии, что
выполняются критерии достоверности тестирования.
11.3.3 Рекомендуется помещать тестовые сосуды в инкубатор в случайном порядке и
ежедневно перемещать их.
11.3.4 Значение pH контрольной пробы во время тестирования не должно увеличиваться более
чем на 1.5 единицы. Для металлов и соединений, которые частично ионизируются при pH в
диапазоне тестового значения pH. необходимо ограничить отклонения значений pH. чтобы получить
воспроизводимые и четкие результаты. Отклонение pH < 0,5 может быть технически обеспечено и
достигается путем установления соответствующего уровня переноса углекислого газа (С02) из
5