ГОСТ 32293-2013
Приложение С
(рекомендуемое)
Процедура культивирования морских водорослей
С.1 Общие положения
В соответствии с настоящей процедурой культивируются культуры, состоящие из одного вида
морских водорослей. Необходимо использовать стерильные водорослевые культуры.
Все операции должны проводиться в стерильных условиях для исключения бактериального
заражения или загрязнения другими водорослями.
С.2 Оборудование
См. пункт 10.1.
С.З Процедуры получения водорослевых культур
С.3.1 Подготовка питательных растворов
Все соли для питательной среды готовят в виде концентрированных основных растворов и
хранят в темноте при низкой температуре. Растворы стерилизуют с помощью фильтрации или
обрабатывают в автоклаве.
Питательную среду готовят путем добавления необходимого количества основного раствора к
стерильной дистиллированной воде, не допуская бактериального заражения. В твердые среды
добавляют 0,8% агар-агара.
С.3.2 Основная культура
Основная культура - это культура водорослей, которая регулярно переносится в свежую
питательную среду в качестве прививочного материала. При нерегулярном использовании водоросли
полосами наносят на скошенные агаровые трубки. Водоросли помещают в новую питательную среду не
менее чем один раз в два месяца.
Основнуюкультуруводорослейвыращиваютвконическихколбах,содержащих
соответствующую питательную среду (объем около 100 мл). Если водоросли выращивают при
температуре 20°С при постоянном освещении, то требуется их еженедельная пересадка.
Во время пересадки определенное количество водорослей переносится стерильной пипеткой в
колбу со свежей питательной средой так. чтобы для быстрорастущих видов начальная концентрация
была приблизительно в 100 раз меньше, чем в исходной культуре.
Скорость роста водорослей может быть определена по кривой роста. Если скорость известна,
то возможно оценить плотность водорослей при пересадке на новую питательную среду. Это должно
быть сделано прежде, чем культура достигнет фазы отмирания.
С.3.3 Предварительная культура
Предварительнаякультурапредназначена дляполучения определенногоколичества
водорослей, подходящих для инокуляции тестовых сосудов. Предварительную культуру выращивают
в условиях тестирования и используют во время экспоненциального роста обычно на 2 - 4-й день
после инкубационного периода. Водорослевые культуры, содержащие деформированные или
аномальные клетки, не должны использоваться.
19