ГОСТ 32293-2013
Окончание таблицы А. 1
Р.
subcapitata
D. subspicatus
N. pelliculosa
A.
flos-aquae
S. leopoliensis
Вес сухих
клеток, (мг/
клетка)
2 -3x10 s
3-4х10‘в
3-4x10"*
1-2x10*
2-3x10*
Скорость
роста3*
(день’)
1,5 -1.7
1.2-1.5
1.4
1.1 -1.4
2.0 - 2.4
Измерено с помощью электронного счетчика частиц.
2) Рассчитано из размера.
3> Наиболее часто наблюдаемая скорость роста в среде OECD при интенсивности света
приблизительно 70 мкЕ м г с"’ при 21°С.
А.2 Рекомендации по культивированию и обращению с рекомендуемыми видами
Pseudokirchneriella subcapitata и Desmodesmus subspicatus
Развитие данных зеленых водорослей легко поддерживать в различных питательных средах.
Сведения о подходящих средах доступны в культурных коллекциях. Клетки, как правило, являются
единичными, и измерения клеточной плотности могут легко выполняться с помощью электронного
счетчика частиц или микроскопа.
Anabaena flos-aquao
Для содержания основной культуры могут использоваться разнообразные среды. Особенно
важно не допускать роста культуры после лаг-фазы при обновлении, на данном этапе
восстановление культуры затруднительно.
Anabaena flos-aquae развивает конгломераты уплотненных клеточных цепочек. Размер
подобных конгломератов может меняться в зависимости от условий культивирования. Необходимо
разделять конгломераты клеток для определения биомассы при подсчете клеток с помощью
электронного счетчика частиц или микроскопа.
Разрушение образцов ультразвуком может использоваться для разделения цепочек в целях
снижения изменчивости при подсчете. Интенсивность и продолжительность обработки ультразвуком
должна быть одинаковой для каждой обработки.
Необходимо подсчитать достаточное количество клеток на гемоцитометре (по крайней мере 400
клеток) для компенсации изменчивости. Это увеличит достоверность микроскопических определений
плотности.
Для определения общего объема клеток Anabaena flos-aquae после разрушения клеточных
цепочек с помощью ультразвука может использоваться электронный счетчик частиц. Энергия
ультразвука должна быть подобрана таким образом, чтобы избежать разрушения клеток.
Суспензия водорослей, используемая для прививания тестовых сосудов, должна быть хорошо
перемешана и гомогенна. Для перемешивания используют вихревую мешалку.
Тестовые сосуды помещают в орбитальный встряхиватель или качалку со скоростью около 150
об/мин. Аналогично для уменьшения склонности Anabaena flos-aquae к образованию конгломератов
можно использовать периодическое встряхивание. Если образование конгломератов происходит, то
необходимополучить представительныеобразцы дляизмерения биомассы.Энергичное
встряхивание перед отбором проб может быть необходимо для разделения клеточных
конгломератов.
Synechococcus leopoliensis
Synechococcus leopoliensis развиваются как единичные клетки, имеющие форму палочек. Клетки
очень мелкие, что затрудняет использование микроскопа для подсчета при измерении биомассы. Для
подсчета также может использоваться электронный счетчик частиц, предназначенный для подсчета
частиц размером до 1 мкм. Также могут использоваться флуормметрические измерения in vitro.
Для содержания данной культуры могут использоваться различные питательные среды.
Navicula pelliculosa
Navicula pelliculosa может формировать конгломераты при определенных условиях роста. За
счет образования липидов водорослевые клетки имеют тенденцию к накоплению в поверхностной
пленке. В подобных случаях для отбора образцов при подготовке представительной пробы для
измерения биомассы требуются специальные условия.Может потребоваться энергичное
перемешивание, например с использованием вихревой мешалки.
13