ГОСТ 32195—2013
водят буфером объем раствора в колбе до отметки. Этот раствор не используют, если основной
стандартный раствор (см. 6.11.2) содержит цистеиновую кислоту и метионин сульфон.
Срок хранения раствора - не более одного года.
6.11.4 Приготовление стандартного раствора внутреннего стандарта, например, нор-
лейцина, молярной концентрации 20 мкмоль1см3
В мерную колбу вместимостью 250 см3(см. 4.12) помещают 0,6560 г норлейцина (см. 5.7),
растворяют в цитратном буфере (см. 6.8) и доводят буфером объем раствора в колбе до отметки.
Срок хранения раствора - не более 6 мес.
6.11.5 Приготовление градуировочного стандартного раствора аминокислот для ис
пользования с гидролизатами молярной концентрации цистеиновой кислоты и метионин
сульфона 0,1 мкмоль/см5и молярной концентрации других аминокислот 0,2 мкмоль1см3
В стакан вместимостью 100 см3помещают 2,2 г хлористого натрия (см. 5.14) и растворяют
его в 30
cmj
цитратного буфера (см. 6.8). Добавляют 4,00 см3основного стандартного раствора ами
нокислот (см. 6.11.2), 4.00 ал3 стандартного раствора цистеиновой кислоты и метионин сульфона (см.
6.11.3) и 0.50 см3стандартного раствора внутреннего стандарта (см. 6.11.4). если он используется.
Доводят значение pH до 2.20 раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 1моль1дм3(см.
6.2). Переносят количественно в мерную колбу вместимостью 50 см3, доводят объем раствора в
колбе до метки цитратным буфером (см. 6.8).
Срок хранения раствора - не более 3 мес.
П р и м е ч а н и е — Уточнения по приготовлению раствора приведены в 13.1.
6.11.6 Приготовление градуировочного раствора стандартных аминокислот для ис
пользования с гидролизатами, подготовленными в соответствии с 9.2.3.2, и для использова
ния с экстрактами (см. 9.1)
Раствор готовят в соответствии с 6.11.5. но при этом исключают хлорид натрия.
Срок хранения раствора - не более 3 мес.
7 Отбор проб
Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.
8 Подготовка проб
Пробу тщательно перемешивают и измельчают до прохода через сито (см. 4.18). Перед из
мельчением пробы с высокой влажностью должны быть высушены при температуре не выше 50 *С
или лиофилизированы. а пробы с высоким содержанием жира - обезжирены летролейным эфиром
(см. 5.6).
9 Проведение испытаний
г
г
г
9.1 Определение содержания свободных форм аминокислот
На весах (см. 4.10) взвешивают от (1.0000 ± 0.0002) г до (5(Ш)± 0.0002)г пробы, подготовлен
ной в соответствии с разделом 8. и количественно переносят в коническую колбу (см. 4.14). добав
ляют 100,0 см3экстракционного раствора (см. 6.5). Встряхивают смесь в течение 60 мин с
помощью механического шейкера или магнитной мешалки (
с
а
. 4.8), дают отстояться, затем 10,0
см3надоса-дочной жидкости переносят пипеткой (см. 4.15) в стакан вместимостью 100 см3.
При перемешивании добавляют 5,0 см3сульфосалициловой кислоты (см. 6.6) и продолжают
перемешивание с помощью магнитной мешалки в течение 5 мин. Раствор фильтруют или центрифу
гируют для того, чтобы удалить осадок. Помещают 10.0 см3полученного раствора в стакан вмести
мостью 100
с
а
г
3и доводят кислотность раствора до 2,20 ед. pH с использованием раствора гид
роксида натрия (
с
а
. 6.2). Количественно переносят в мерную колбу соответствующего объема (необ
ходимого для хроматографии) и доводят объем раствора до метки цитратным буфером (
с
а
. 6.8).
Если используется внутренний стандарт, добавляют 1,00 см3 внутреннего стандарта (см.
6.11.4) на каждые 100 см" окончательного объема раствора и доводят объем до метки цитратным бу
фером (см. 6.8).
Хроматографию проводят в соответствии с 9.3.
Если полученный экстракт невозможно проанализировать ВЭЖХ в тот же день, его следует
хранить при температуре монве 5 °С.
5