ГОСТ 32195-2013
Раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 1 моль/дм3(см. 6.2) доводят кислот
ность раствора до 2,20 ед. pH и переходят к 9.2.4.
9.2.3.3 Для хроматографической системы, не требующей низкой концентрации натрия, гидро
лизат. полученный в соответствии с 9.2.2.3 или 9.2 2.4. частично нейтрализуют, осторожно добавляя
при помешивании 17 см3раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 7,5 моль1дм3(см. 6.1),
при этом температура раствора должна быть ниже 40 °С.
При комнатной температуре доводят кислотность раствора до 2,20 ед. pH сначала раствором
гидроокиси натрия молярной концентрации 7,5 моль/длГ (см. 6.1). а потом раствором гидроокиси
натрия молярной концентрации 1 моль/дм3(см. 6.2). Продолжают подготовку по 9.2.4.
9.2.4 Подготовка гидролизата для хроматографии
Гидролизат с установленным значением pH (см. 9.2.3.2 или 9.2.3.3) количественно переносят
с помощью цитратного буфера (см. 6.8) в мерную колбу вместимостью 200 см3(см. 4.13) и доводят
буфером объем раствора в колбе до метки.
Если до этого еще не был использован внутренний стандарт, то добавляют 2.00 см3внутрен
него стандарта (см. 6.11.4) и доводят объем раствора в колбе до метки цитратным буфером (см. 6.8).
Раствор тщательно перемешивают.
Далее переходят к хроматографии по 9.3.
Если полученный экстракт невозможно проанализировать ВЭЖХ в тот же день, его хранят при
температуре ниже 5 °С.
9.3Хроматография
Перед проведением хроматографии температуру экстракта (см. 9.1) или гидролизата (см. 9.2)
доводят до комнатной температуры. Перемешивают смесь и фильтруют необходимое количество че
рез мембранный фильтр (см. 4.5). Полученный прозрачный раствор используют для ионообменной
хроматографии (аминокислотный анализатор или ВЭЖХ оборудование).
Введение пробы может быть выполнено вручную или автоматически. Важно, чтобы в колонку
вводилось одинаковое количество (♦ 0,5 %) раствора стандарта и пробы, за исключением случаев,
когда применяется внутренний стандарт (для хроматографических систем, требующих низкой
концентрации натрия), и когда соотношение аминокислот в растворах стандарта и пробы должны
быть как можно ближе.
Частота выполнения градуировки зависит от стабильности растворов нингидрина и аналити
ческой системы. Необходимо разбавлять стандарт или образец в цитратном буфере (см. 6.8). чтобы
площадь пика стандарта составляла от 30 % до 200 % площади пика аминокислот пробы.
Примеры хроматограмм стандарта аминокислот и окисленного образца корма приведены
в приложении А.
Хроматограммы аминокислот могут незначительно отличаться в зависимости от типа анали
затора и используемых сорбентов. Выбранная система должна быть способна отделять аминокисло
ты друг от друга и от нингидрии-позитивных материалов. В процессе работы
хроматографической системы должна сохраняться линейная зависимость при изменении количества
аминокислот, добав ляемых в колонку.
При хроматографровании эквимолярного раствора упомянутых ниже аминокислот должно со
блюдаться соотношение высот долин и пиков. Этот эквимолярный раствор должен содержать не ме
нее 30 % от максимальной концентрации каждой аминокислоты, которую можно определить с помо щью
аминокислотного анализатора.
При разделении треонина и серина отношение высоты долины и высоты нижнего из двух пе
рекрывающихся пиков аминокислот на хроматограмме не должно превышать соотношение 2:10 (если
определяются только цистин/цис-теин. метионин, треонин и лизин, то недостаточное разделение со
седних пиков будет отрицательно влиять на их определение). Для всех других аминокислот, разделе
ние должно быть лучше, чем соотношение 1:10.
Система должна обеспечивать отделение лизина от «лизин артефактов» и ориитина.
10 Обработка результатов
Площади пиков стандартного образца и пробы измеряют для каждой аминокислоты.
Содержание аминокислоты в анализируемой пробе, iv. r/кг, вычисляют по формуле 1или. ес
ли используется внутренний стандарт, по формуле 2
А, с-М
У,
W ~ А .
•/
и
■
1
ООО
‘
(V
7