ГОСТ 32195-2013
.
г
г
9.2Определение общего содержания (свободных и связанных форм в сумме) отдель
ных аминокислот
9.2.1 Окисление
Взвешивают от (0.1000 ± 0.0002) г до (1.0000 ± 0.0002) г пробы, подготовленной в соответ
ствии с разделом 8:
-в круглодонную колбу вместимостью 100 см3 (см. 4.1) для открытого гидролиза (
с
а
г
9.2.2.3).
- или в круглодонную колбу вместимостью 250 см3(см. 4.1), если требуется низкая концен
трация натрия (см. 9.2.3.2).
-или в емкость (см. 4.2), для закрытого гидролиза (см. 9.2.2А).
Взятая для анализа проба должна содержать около 10 мг азота, а содержание в ней влаги не
должно превышать 100 мг.
Колбу или емкость с пробой помещают на ледяную баню, после охлаждения до температуры
0 °С добавляют 5 см3смеси для окисления (см. 6.7) и перемешивают, используя стеклянную палочку
с загнутым кончиком (см. 4.20). Закрывают колбу или емкость, содержащую палочку, герметичной
крышкой. Ледяную баню, с закрытой посудой, помещают в холодильник при температуре 0 ‘С. Через
16 ч сосуд достают из холодильника и удаляют избыток смеси для окисления путем добавления 0.84 г
дисульфита натрия.
Далее проводят гидролиз по 9.2.2.1.
9.2.2 Гидролиз
9.2.2.1 Гидролиз окисленных проб
В окисленную пробу, подготовленную в соответствии с 9.2.1, добавляют 25 см3смеси для гид
ролиза (см. 6.4), смывая при этом остатки пробы со стенок сосуда и палочки. В зависимости от ис
пользуемого способа гидролиза продолжают подготовку по 9.2.2.3 для открытого гидролиза или
по 9.2.2.4 для закрытого гидролиза.
9.2.2.2 Гидролиз неокисленных проб
Взвешивают от (0.1000 ± 0.0002) до (1.0000 ± 0.0002) пробы, подготовленной в соответствии с
разделом 8. в круглодонную колбу вместимостью 100 или 250 см3(см. 4.1) или в емкость вместимо
стью 100 см3, снабженную винтовой крышкой (см. 4.2). Проба должна содержать около 10 мг азота.
Осторожно добавляют 25 см3смеси для гидролиза (см. 6.4) и перемешивают с пробой. Далее дей
ствуют в соответствии с 9.2.2.3 или Э.2.2.4.
9.2.2.3 Открытый гидролиз
К смеси в колбе, подготовленной в соответствии с 9.2.2.1 или 9 2.2.2, добавляют три стеклян
ных шарика и кипятят с обратимым холодильником непрерывно в течение 23 ч. После завершения
гидролиза промывают холодильник 5 см? цитратного буфера (
с
а
. 6.8). отключают колбу и охлаждают
на ледяной бане. Продолжают подготовку в соответствии с 9.2.3.
9.2.2 4 Закрытый гидролиз
Помещают колбу или емкость, содержащую смесь, приготовленную в соответствии с 9.2.2.1
или 9 2.2.2. в сушильный шкаф (см. 4.3) с температурой 110 е С. В течение первого часа, с целью
предотвращения повышения давления (в связи с выделением газообразных вещества) и для избежа
ния взрыва, не закрывают емкость крышкой, размещая ее поверх сосуда. Через час закрывают ем
кость крышкой и оставляют в сушильном шкафу на 23 ч. По завершении гидролиза достают колбу
или емкость из сушильного шкафа, осторожно открывают крышку и охлаждают на ледяной бане.
Используя цитратный буфер (см. 6.8). содержимое емкости количественно переносят в стакан
или круглодонную колбу вместимостью 250 см3, в зависимости от способа регулировки значения pH
(см. 9.2.3).
Далее продолжают подготовку в соответствии с 9.2.3.
9.2.3 Установка значения pH
9.2.3.1 В зависимости от чувствительности аминокислотного анализатора к натрию для уста-
новки значения pH действуют в соответствии с 9.2.3.2 или 9.2.3.3.
9.2.3.2 Когда используется аминокислотный анализатор или хроматографическая система,
требующие низкой концентрации натрия, рекомендуется добавлять стандартный раствор внутреннего
стандарта (см. 6.11.4).
В этом случае в гидролизат перед выпариванием добавляют 2.00 см3 раствора внутреннего
стандарта (см. 6.11.4).
В гидролизат, полученный в соответствии с 9.2.2.3 или 9.2.2.4. добавляют две капли 1-
октанола.
С помощью роторного испарителя (
с
а
. 4.7) в вакууме при температуре 40 °С уменьшают объ
ем до 5-10 см3. Если гидролизат случайно выпарился до объема менее 5 см3, то его отбрасывают и
анализ проводят сначала.
6