ГОСТ 10444.8—2013
Колонии этих штаммов не будут окружены зоной выпадения осадка. Такие атипичные колонии также отбирают
для подтверждения принадлежности к В. cereus.
Если 1.0 см3 инокулята был распределен на поверхности пяти чашек (9.2.2), то эти чашки счи
тают за одну для последующего подсчета и подтверждения.
9.4 Подтверждение
9.4.1 Отбор колоний для подтверждения
С каждой чашки, отобранной согласно 9.3. отбирают пять типичных или атипичных колоний. Ес
ли на чашке менее пяти колоний, берут все имеющиеся колонии. Подтверждают эти колонии, как ука
зано в 9.4.2 - 9.4.5
Если чашки Петри содержат большое количество колоний и нет возможности отобрать хорошо
изолированные колонии, то делают посев штрихом пяти колоний на чашки со средой (5.2.4). Посевы
инкубируют при температуре (30 ± 1) °С в течение 18-24 ч.
Отбирают с каждой чашки, по крайней мере, одну хорошо изолированную колонию, окрашенную
в розовый цвет. Подтверждают эту колонию, как указано в 9.4.2 - 9.4.5.
9.4.2 Гемолитический тест на агаре с бараньей кровью
Засевают штрихом отобранные колонии (9.4.1) на поверхность агара с бараньей кровью (5.3)
так. чтобы можно было правильно интерпретировать гемолитическую реакцию.
Посевы инкубируют при температуре (30 ± 1) °С в течение (24 ± 2) ч и интерпретируют гемоли
тическую реакцию. Гемолитический тест является арбитражным.
9.4.3 Биохимическая интерпретация
Т а б л и ц а 1 - Результаты тестов
Наименование тестов
Значение определенных тестов, подтверждающих принадлежность к презумп-
тивным Bacillus cereus
МУР агар (9.3)
Гемолиз (9.4.2)
Образование колоний розового цвета, окруженных осадком
Положительная реакция.
Ширина гемолитической зоны гложет варьировать
9.4.4 Окраска по Граму
Для определения отношения микроорганизмов к окраске по Граму из колоний приготавлива
ют мазки, окрашивают их по ГОСТ 30425 и микроскопируют.
В мазках В. cereus имеет вид крупных грамположительных палочек размером 1.0-1.2 * 3.0-
5.0 мкм со слегка закругленными концами, лежащих в виде цепочек или штакетообразных скопле
ний. реже отдельно друг от друга.
В. cereus образует субтерминальные или центральные споры. В живом препарате клетки по
движны или подвижность слабо выражена.
Дополнительный тест на подвижность может помочь дифференцировать В. cereus от В.
anthracis в случае предположения присутствия последних.
Допускается окраску по Граму заменять тестом Г регерсена. Для этого на предметном стекле
в капле 3 %-ного водного раствора калия гидроокиси эмульгируют культуру микроорганизмов, взя
тую из колонии с плотной средой.
Если через несколько секунд взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, то это
указывает на принадлежность испытуемой культуры к грамотрицательным бактериям. У грамполо
жительных бактерий слизистых нитей не образуется.
Для идентификации возможно проведение окрашивания препаратов по нормативным доку
ментам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.
9.4.5 Определение редукции нитратов
При проведении не арбитражных испытаний допускается тест на гемолиз заменять тестом на
определение редукции нитратов.
При постановке реакции на подтверждение редукции нитратов предварительно убеждаются в
том. что сама среда не содержит нитритов. Для этого в две контрольные пробирки со средой до
бавляют no 0.2-0.5 см ’ смеси равных объемов растворов, приготовленных по 5.8 и 5.9. Если в те
чение 15 мин не происходит покраснения среды, то ее используют для определения
нитратредуци-рующей способности. При использовании агаризованной среды реактивы наносят
на поверхность скошенного нитратного агара.
Для контроля отсутствия нитритов в питательной среде допускается использование йодкрах-
мального реактива по ГОСТ 10444.1
7