rOCTEN 15835-2013
бы Полученный метанольный экстракт переносят с помощью пастеровской
пипетки в делительную воронку по 5.19. Процедуру ополаскивания колбы
повторяют еще раз, используя новую порцию метанола объемом 3 см3. Мета-
нольные экстракты объединяютв делительной воронке. Далее в делительную
воронку вносят 34 см3 фосфатно-хлоридного буферного раствора по 4.14, со
держимое воронки интенсивно встряхивают в течение 1 мин
В делительную воронку вносят 50 см3гексана по 4 18, содержимое во
ронки аккуратно встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев ниж
ний слой переносят в другую делительную воронку, а верхний гексановый
слой отбрасывают. Данную процедуру повторяют с использованием новой
порции гексана объемом 50 см3. Нижний слой переносят в центрифужный
стакан по 5.9 и центрифугируют в течение 10 мин при центробежном ускоре
нии 15300g с применением охлаждения приблизительно до температуры 4 °С
для отделения остатка жировых веществ. Водную фазу отделяют и фильтру
ют в мерный цилиндр через воронку с бумажным фильтром по 5.6.
Примечание - Следует избегать перемешивания водной и органической фаз.
Если полное отделение водной фазы затруднительно, отбирают пипеткой и фильтруют не
менее 35 см3водной фазы
6.2 Очистка экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом
Иммуноаффинную колонку по 4.26 подсоединяют к вакуумному мани-
фолду по 5.5. К колонке присоединяют резервуар вместимостью 50 см3 или
20 см3по 5.11.
Перед кондиционированием колонку выдерживают до достижения ею
комнатной температуры Для кондиционирования в резервуар, присоединен
ный к верхнему концу колонки, вносят 20 см3 фосфатно-хлоридного буфер
ного раствора по 4.14 и дают ему протечь через колонку под действием силы
тяжести со скоростью от 2 до 3 см3/мин. Следует принять меры к тому, чтобы
небольшое количество раствора (около 0,5 см3) осталось над колонкой до
момента внесения раствора пробы
Аликвоту экстракта, полученного по 6.1, объемом 30 см3 вносят в ре
зервуар и пропускают через иммуноаффинную колонку. Скорость протока
11