ГОСТ РИСО 19001—2013
3) массовая фракция парарозанилина катиона: 85 %, определенная с помощью абсорбционной
спектрометрии;
4) допустимые пределы интерферирующих веществ, приведенные как массовые доли:
- вода: менее 1%;
- неорганические соли: менее 0,1 %;
-детергенты: не присутствуют;
- окрашенные примеси: метилированные гомологи парарозанилина могут присутствовать в следовых
количествах, определяемые с помощью тонкослойной хроматографии, но акридин отсутствует.
- индифферентные соединения: 14 % растворимого крахмала;
c) длина волны максимально абсорбции раствора красящего вещества: 542 нм;
d) тонкослойная хроматография: присутствует один основной компонент, соответствующий
парарозанилину: метилированные гомологи парарозанилина в следовых количествах;
e) обращение и хранение: стабилен при хранении в тщательно закупоренной коричневой бутылке при
комнатной температуре от 18 "С до 28 °С.
А.3.2 Предназначенное применение реакции Фельгена - Шиффа
А.3.2.1 Тип (типы) материала
Реакция Фельгена - Шиффа применяется для парафинированных или пластиковых срезов различных
видов тканей или цитологического материала (мазок, отпечаток ткани, культура клеток, монослой):
А.3.2.2 Обращение и обработка перед окрашиванием
А.3.2.2.1 Возможные фиксирующие вещества
Возможные фиксирующие вещества включают в себя:
a) гистология: формальдеплд (массовая доля 3.6 %). забуференный фосфатом. (pH =7.0);
b
) цитология:
1) жидкий фиксирующий материал: этанол (обьемная доля 96 %);
2) высушенный на воздухе материал:
- формальдегид (массовая доля 3.6 %). забуференный фосфатом:
- метанол+ формальдегид (массовая доля 37 %) +уксусная кислота (массовая доля 100 %). смешанные
вобьемах (85 +10 + 5) мл.
Материал, фиксированный в фиксаторе Буйна, непригоден для этой реакции.
Детали методики, примененной изготовителем для исследования реактивности хромогенного реагента,
приведены вА.3.2.2.2 - А.3.2.4.
А.3.2.2.2 Реагент парарозанилин-Шифф
Растворяют 0.5 г парарозанилин-хлорида в 15 мл 1 моль/л соляной кислоты. Добавляют 85 мл водного
раствора KjS;Os(массовая доля 0.5 %). Ожидают 24 ч. Взбалтывают 100 мл этого раствора с 0.3 г древесного
угля в течение 2 мин и профильтровывают. Хранят бесцветную жидкость при температуре не ниже 5 "С. Раствор
стабилен в течение по крайней мере 12 мае в плотно закрытой посуде.
А.3.2.2.3 Раствор для промывания
Растворяют 0.5 г Кз&О» в 85 мл дистиллированной воды. Добавляют 15 мл 1 моль/л соляной кислоты.
Раствор готов к немедленному применению и может быть использован в течение 12 ч.
А.3.2.3 Методика окрашивания
А.3.2.3.1 Депарафинируют парафинированные срезы в ксилене в течение 5 мин. затем промывают в
течение 2 мин, сначала в этаноле с объемной долей 99 %, а затем в этаноле с объемной долей 50 %.
А.3.2.3.2 Смачивают пластиковые срезы, депарафинированные парафинированные срезы и
цитологический материал вдистиллированной воде втечение 2 мин.
А.3.2.3.3 Гидролизуют материал в 5 моль/л соляной кислоте при температуре 22 *С в течение от 30 до
60 мин (точное время гидролиза зависит от типа материала).
А.3.2.3.4 Промывают дистиллированной водой в течение 2 мин.
А.3.2.3.5 Окрашивают реагентом парарозанилин в течение 1ч.
А.3.2.3.6 Промывают в трех последовательных сменах промывного раствора по 5 мин в каждой.
А.3.2.3.7 Дважды промывают дистиллированной водой, по 5 мин каждый раз.
А.3.2.3.8 Дегидратируют в этаноле с объемной долей 50 % , затем с 70 % и наконец в 99 % -ном
этаноле, по 3 мин каждый раз.
А.3.2.3.9 Дважды промывают в ксилене. по 5 мин каждый раз.
А.3.2.3.10 Извлекают в синтетическую гидрофобную смолу.
А.3.2.4 Ожидаемые результаты
Ожидается получение следующих результатов с типами материалов, перечисленных вА.3.2.1:
Для ядер клеток (ДНК): красный цвет.
А.4 Иммунохимическая демонстрация рецепторов эстрогенов
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Реагент, содержащий азид натрия (15 ммоль/л). NaN3может реагировать с
свинцом или медью, образуя взрывчатые азиды металлов. При удалении смыть большим объемом
воды.
А.4.1 Моноклональный мышиный античеловеческий рецептор эстрогенов
Следующая информация относится к моноклональному мышиному античеловеческому рецептору
эстрогенов.
а) идентичность продукта: моноклональный мышиный античеловеческий рецептор эстрогенов, клон 1D5;
7