ГОСТР ИСО 19001—2013
b) состав:
1) молекулярная формула, включающая противоион: C,;HVjN ;0’ СГ;
2) молярная масса с (или без) противоионом: 302.75 г моль’ (267,30 г моль );
3) массовая доля пиронина Y катиона: 80 %, определена с помощью абсорбционной спектрометрии;
4) допустимые пределы интерферирующих веществ, приведенные как массовые доли:
- вода: менее 1 %;
- неорганические соли: менее 0.1 %;
- детергенты: отсутствуют;
- окрашенные примеси, включая кристаллы виолета: не обнаруживаются с помощью тонкослойной
хроматографии:
- индифферентные соединения: 19 % растворимого крахмала;
c) длина волны максимальной абсорбции раствора красящего вещества: 550 нм;
d) тонкослойная хроматография: присутствует только один основной компонент, совпадающий с
лиронином Y;
e) обращение и хранение: стабилен при хранении в тщательно закрытой бутылке из коричневого стекла
при комнатной температуре от 18 "С до 28 °С.
А.2.4 Предназначенное применение метода окрашивания метиловым зеленым-лиронином Y
А.2.4.1 Тип (типы) материала
Краска метиловый зепеный-пиронин Y применяется для окрашивания свежезамороженных,
парафинированных или пластиковых срезов тканей различных видов.
А.2.4.2 Обращение и обработка перед окрашиванием
Возможные фиксирующие средства включают в себя:
- жидкость Карноя [этанол (объемная доля 99 %) + хлороформ + уксусная кислота (массовая доля 99 %),
смешанные в объемах (60 + 30 + 10) мл] или
- формальдегид (массовая доля 3.6 %), забуференный фосфатом (pH = 7.0); рутинное высушивание,
очистка, пропитывание и покрытие парафином, обычное приготовление срезов с помощью микротома.
А.2.4.3 Рабочий раствор
Готовят раствор этилового зеленого или метилового зеленого из количества, соответствующего массе
0,15 г чистого красящего вещества, рассчитанного как окрашенный катион (в приведенных выше примерах 0.176
г в каждом случае) в 90 мл горячей (температура 50 иС) дистиллированной воды.
Растворяют количество, соответствующее массе 0,03 г пиронина Y, рассчитанного как окрашенный
катион (в примере, приведенном выше 0.038 г) в 10 мл 0,1 моль/л фталатного буфера (pH = 4.0). Смешивают
последний раствор с раствором этилового зеленого или метилового зеленого.
А.2.4.4 Стабильность
Рабочий раствор стабилен по крайней мере одну неделю при хранении в плотно закрытой бутыли из
коричневого стекла при комнатной температуре от 18 *С до 28 “С.
А.2.4.5 Методика окрашивания
А.2.4.5.1 Деларафинируют срезы.
А.2.4.5.2 Смачивают срезы.
А.2.4.5.3 Окрашивают срезы в течение 5 мин при комнатной температуре около 22 "С в рабочем
растворе.
А.2.4.5.4 Промывают срезы вдвух сменах дистиллированной воды, от 2 до 3 с в каждой.
А.2.4.5.5 Стряхивают излишки воды.
А.2.4.5.6 Активируют в трех сменах 1-бутанола.
А.2.4.5.7 Переносят непосредственно из 1-бутанола в гидрофобную синтетическую смолу.
А.2.4.6 Ожидаемый результат (результаты)
Ожидается получение следующих результатов с типами материалов, перечисленными в А.2.4.1:
а) для ядерного хроматина: зеленый (фиксатор Карпов) или голубой
(фиксатор формальдегид);
а) для нуклеол и цитоплазмы, богатой рибосомами: красный (фиксатор
Карнов) или лиловато- красный (фиксатор формальдетд):
c) для матрицы хрящей и гранул тучных клеток: оранжевый;
d) для мышц, коллагена и эритроцитов; не окрашенные.
А.З Реакция Фельгена - Шиффа
А.3.1 Красящее вещество парарозанилин
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Для R 40: возможный риск необратимых эффектов.
Для S 36/37: необходима защитная одежда и перчатки.
Следующая информация относится к красящему веществу парарозанилин.
a) идентичность продукта:
1) парарозанилин (синонимы: основной рубиновый, парафуксин, парамагента. магента 0);
2) регистрационный номер CAS: 569-61-9;
3) наименование и номер индекса красок, основной красный 9. 42500;
b
) состав:
1) молекулярная формула, включающая противоион: C,uHisNj* СГ;
2) молярная масса с (и без) лритивоиона: 323,73 г моль (288.28 г моль ’);
6