ГОСТ 28085-2013
1000 см3 и нагревают до полного растворения. Охлаждают до комнатной температуры. Если
требуется, добавляют 1 моль/дм3раствор едкого натра, чтобы pH после стерилизации был 7.3
±
0,2.
Фильтруют для получения прозрачной среды, разливают по пробиркам и стерилизуют в автоклаве
при температуре 121 °С в течение 15 мин.
Для получения агаризованной питательной среды к приготовленной жидкой соево-казеиновой
среде добавляют 10 - 20 г агара.
7.5.8 Приготовление жидкой среды Сабуро
Для приготовления жидкой среды Сабуро в 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 10 г
сухого ферментативного пептона, кипятят в течение10 мин. фильтруют, прибавляют 40 г
глюкозы, устанавливают соляной кислотой массовой долей 1 % - 2 % pH (5.6
±
0,2). разливают в
стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.
Для получения агаризованной питательной среды к приготовленной жидкой среде Сабуро
добавляют 10 - 20 г агара.
7.5.9 Приготовление среды Хейфлика
7.5.9.1 Для приготовления жидкой среды Хейфлика готовят основу среды: берут 90.0 см3
бульона из экстракта говяжьего сердца. 10.0 см3дрожжевого экстракта концентрацией 250 г/дм3, 5.0
cmj
раствора фенолового красного концентрацией 0.6 г/дм3, доводят до кипения и кипятят в течение
10 мин. Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.
7.5.3.2 Затем основу среды охлаждают до температуры 40 ° С - 45 °С и добавляют 20.0 см3
стерильной лошадиной сыворотки, не подвергнутой нагреву и проверенной на контаминацию
микоплазмами. 1,20 см3 стерильного раствора дезоксирибонуклеиновой кислоты концентрацией 2
г/дм3и 0,25 см3 пенициллина с содержанием пенициллина 20000 МЕ/см3. Значение pH доводят до 7.8
раствором едкого натра массовой концентрацией 10 %. Среду не стерилизуют.
7.5.9.3 Для приготовления твердой среды к основе жидкой среды Хейфлика no 7.5.9.1
добавляют агар в концентрации 15 г/дм3, стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в
течение 15 мин. охлаждают до температуры 40 °С - 45 °С, а затем добавляют компоненты по 7.5.9.2.
7.5.10 Приготовление среды Фрея
Среда рекомендуется для обнаружения Mycoplasma Synowiae.
Для приготовления жидкой среды Фрея смешивают 90.0 см3 бульона из экстракта говяжьего
сердца. 2.0 см3раствора моногидрата глюкозы концентрацией 500 г/дм3. 12,0 см3свиной сыворотки,
инактивированной при 56 °С в течение 30 мин. 5.0 см3раствора фенолового красного концентрацией
0.6 г/дм3. Стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. охлаждают до
температуры 40 0С - 45 °С. а затем добавляют 0.25 см3 пенициллина (20000 МЕ/см3), 0.025 см3
смеси витаминов по 7.5.1,1.0 см3 раствора (З-Никотинамидадениндинуклеотда концентрацией 10 г/см3
и 1.0 см3раствора цистеина гидрохлорида концентрацией 10 г/дм3. Значение pH среды доводят до 7.8
добавлением раствора едкого натра массовой концентрацией 10 %.
Для приготовления твердой среды Фрея смешивают 90,0 см3 бульона из экстракта говяжьего
сердца. 2.0 см3 раствора моногидрата глюкозы концентрацией 500 г/дм3, 12,0 см3свиной сыворотки,
инактивированной при 56 °С в течение 30 мин. 5.0 см3 раствора фенолового красного концентрацией 0.6
г/дм3. 1.4 г очищенного агара, значение pH доводят до 7.8. стерилизуют автоклавированием при
температуре 121 °С в течение 15 мин. затем охлаждают до температуры 40 0С - 45 °С и добавляют 0.25
см3 пенициллина (20000 МЕ/см3). 0,025 см3 смеси витаминов. 1.0 см3 раствора (J-
Никотинамидадениндинуклеотда концентрацией 10 г/см3и 1.0 см3 раствора цистеина гидрохлорида
концентрацией 10 г/дм3.
7.5.11 Приготовление среды Фриса
Среда рекомендуется для обнаружения микоплазм, кроме птичьих.
ДляприготовленияжидкойсредыФрисаберут800см3сбалансированного
модифицированного солевого раствора Хенкса. 67 см3 дистиллированной воды. 135 см3экстракта из
сердца и мозгов. 248 см3бульона PPLO, 60 см3дрожжевого экстракта концентрацией 170 г/дм3, 250
мг бацитрацина. 250 мг метициллина, 4,5 см3 фенолового красного концентрацией 5 г/дм3. Среду
стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин. затем охлаждаютдо
температуры 40 3С - 45 °С, значение pH доводят до 7.40 - 7.45 и добавляют стерильно 165 см3
лошадиной сыворотки. 165 см3 свиной сыворотки, проверенных на контаминацию микоплазмами.
Для приготовления твердой среды Фриса смешивают 800 см3 сбалансированного
модифицированного солевого раствора Хенкса. 200 мг DEAE - декстрана и 15.65 мг очищенного
агара. Полученную смесь стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и
добавляют к 1740 см3 жидкой среды Фриса.
7.6 Условия хранения питательных сред
7.6.1 Сроки и условия хранения культуральных сред - по ГОСТ ISO 11133-1.
7